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大鼠、小鼠心臟干細(xì)胞（祖細(xì)胞）分離培養(yǎng)方法

發(fā)布時(shí)間：2021/6/17 9:28:32      閱讀次數(shù)：504

  心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病，如果失去了心肌細(xì)胞，就會(huì)引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細(xì)胞幾乎沒(méi)有再生能力，一旦失去就不能再生。從前認(rèn)為心臟當(dāng)中沒(méi)有干細(xì)胞，所以心肌沒(méi)有再生能力，但是近年的研究表明，成體心臟內(nèi)部也會(huì)存在一些心肌干細(xì)胞。公司開(kāi)發(fā)出一種新型心肌干細(xì)胞培養(yǎng)方法，希望能為這項(xiàng)研究的科學(xué)工作者提供幫助。

     

       細(xì)胞培養(yǎng)操作：
       1.摘取出心臟，去掉心臟包膜，把心尖部分剪下來(lái)（心尖部分是心室部分，心肌細(xì)胞含量高）。
       2.剪碎，移入15或50ml離心管中，用PBS多洗幾遍，盡量把血細(xì)胞洗掉。
       3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養(yǎng)基，37℃、一小時(shí)浸泡。
       4.采用貼塊法：用槍把組織塊連同培養(yǎng)基一同移入T25瓶中，然后用槍吸出培養(yǎng)基。在培養(yǎng)箱中放置1-2小時(shí)，待組織粘貼在瓶底后，加入3ml含20%血清的IMDM培養(yǎng)基。
       5.在貼塊培養(yǎng)到第三、四天時(shí)，從組織塊上會(huì)脫落一些細(xì)胞團(tuán)和單個(gè)細(xì)胞，收集到15ml離心管中。
       6.采用300rpm離心（或自然沉淀），去上清，取沉淀部分的細(xì)胞培養(yǎng)（多為細(xì)胞團(tuán)）。
       7.用IMDM/DMEM/F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)：10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
       8.細(xì)胞團(tuán)中的細(xì)胞在第二天就會(huì)出現(xiàn)圓形擴(kuò)散生長(zhǎng)（呈集落生長(zhǎng)，像太陽(yáng)發(fā)光的模樣），細(xì)胞形態(tài)不像成纖維細(xì)胞那樣呈梭形狀，而是有些偏圓。

       9.心臟干細(xì)胞生長(zhǎng)速度很快，兩三天就能長(zhǎng)滿。


 

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    6.實(shí)驗(yàn)完成，提供完整實(shí)驗(yàn)說(shuō)明和部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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