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HK-2細(xì)胞培養(yǎng)常見問題攻略

發(fā)布時間：2021/12/28 9:13:21      閱讀次數(shù)：830

 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞系HK2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過轉(zhuǎn)入HPV-16 E6/E7基因構(gòu)建而成，并在無血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長了一年多。HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。

 

陽性表達(dá)：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細(xì)胞角蛋白; α3β1 整合素；纖連蛋白。

 

陰性表達(dá)：因子VIII 相關(guān)抗原、6.19 抗原和 CALLA 內(nèi)肽酶呈陰性。

 



常見問題


 

在培養(yǎng)HK2細(xì)胞的時候，常會出現(xiàn)一些細(xì)節(jié)問題，不可掉以輕心。本文為大家總結(jié)培養(yǎng)HK2細(xì)胞常見的問題，以及解決方案。

 

出現(xiàn)空泡

01

 

空泡問題需要結(jié)合生長速度和形態(tài)來看：如果生長速度和形態(tài)正常，空泡可能是正常的細(xì)胞活動，傳代后空泡即可減輕。

 

如果生長較慢，形態(tài)異常，空泡可能是自噬行為，可加大血清比例（不超過20%）或更換血清品牌改善細(xì)胞狀態(tài)。

 

HK-2細(xì)胞

 

出現(xiàn)拉絲

02

 

細(xì)胞伸出細(xì)長的絲有兩種情況：

 

第一種情況是HK2細(xì)胞遷移造成的，HK2細(xì)胞在培養(yǎng)皿上并不是靜態(tài)的，也會出現(xiàn)遷移。遷移時HK2細(xì)胞的一部分滯留在原處，遷移的過程中會拉出一條細(xì)長的絲。這種情況下拉絲的細(xì)胞占少數(shù)，細(xì)胞整體的生長狀態(tài)是正常的，不用特殊處理。

 

第二種情況是營養(yǎng)不良，拉絲的細(xì)胞占大多數(shù)，同時細(xì)胞生長緩慢，此時可以提高血清比例（不超過20%）或添加5 ng/mL EGF。

 

形態(tài)不對

03

 

正常的HK2呈鋪路石狀生長，如果HK2細(xì)胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀（如下圖），可能是因為培養(yǎng)環(huán)境發(fā)生了較大的改變，比如從有血清到無血清的轉(zhuǎn)換，此時換回原來的培養(yǎng)條件細(xì)胞可逐漸恢復(fù)；如果細(xì)胞變得細(xì)長，這時候可能是營養(yǎng)不良。

HK2細(xì)胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀

 

生長緩慢

04

 

在普諾賽標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK2細(xì)胞的傳代周期約為3天。

 

當(dāng)細(xì)胞生長緩慢，一周無法傳代時，需要考慮培養(yǎng)基特別是血清是否合適。

 

選擇合適的培養(yǎng)基及血清，同時加大細(xì)胞接種密度可以改善。

 



培養(yǎng)基選擇


 

HK-2最初建系使用無血清培養(yǎng)，眾多文獻(xiàn)以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下，HK2細(xì)胞也能良好生長。

 

但胎牛血清的質(zhì)量是關(guān)鍵，胎牛血清品質(zhì)越高，HK-2狀態(tài)越好。

 

若使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養(yǎng)瓶，以促使貼壁。

 

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