注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

貨號：YX-W-B603

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑10mg×1支，4℃保存；臨用前配置成0.1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)水溶液； 試劑二：粉劑×1瓶， 4℃保存；

產(chǎn)品說明：

糖原含量檢測試劑盒說明書

微量法

糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖，是糖的主要的儲存形式之一，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝臟合成糖原，血糖降低時(shí)，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此，肝糖原對維持血糖的相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式,在劇烈運(yùn)動消耗大量血糖時(shí)，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃�或葡萄糖�?/span>

測定原理：蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、濃硫酸（不允許快遞） 和蒸餾水。

操作步驟：

一、糖原提取：

1﹑細(xì)胞或細(xì)菌：收集500~1000 萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；加入0.75mL 提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；轉(zhuǎn)移至10mL 試管中， 置于95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5mL，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。

2﹑組織：稱取0.1~0.2g 樣品，置于10mL試管中；加入0.75mL提取液，置于95℃水浴20min（蓋緊， 防止水分散失），隔5min振搖試管1 次，使充分混勻；待組織全部溶解后，取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5mL，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。

二、步驟和加樣表

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至620nm，蒸餾水調(diào)零。調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。

2、在試劑二中倒入6mL 蒸餾水，緩慢倒入24mL 濃硫酸，充分溶解混勻后使用。4℃有效期一周。

3、加樣表（在 EP 管中反應(yīng)）：

混勻，置95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL 轉(zhuǎn)移至微量比色皿或96 孔板中，于620nm 波長處，分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管吸光度，分別記為A1、A2  和A3。

注意：1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要測一次。

2、如果A3-A1 大于2，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。三、糖原含量的計(jì)算：

1、按照樣本鮮重計(jì)算

糖原（mg/g 鮮重）=1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W

2、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr

3、按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

糖原（mg/104cell）=1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

1.11：是此法測得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù)，即111μg 糖原用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于

100μg 葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色；C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1mg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中待測樣本體積，0.06mL；V2：提取液體積，5mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量：以104為單位，萬個(gè)。

注意：最低檢測限為10ng/g 鮮重或0.1ng/mg prot。

糖原含量檢測試劑盒說明書