38C13小鼠B淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)說明書
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
二、細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用 75%酒精
噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱
中靜置 3-4 小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同
倍數(shù)拍照保存（最好 40x,100x,200x 各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默
認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶
的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對比培養(yǎng)）
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
細(xì)胞傳代：如果未超過 80%匯合度時(shí)，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml 完全培
養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超 80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步
驟如下細(xì)胞傳代：
A1、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄上清液，補(bǔ)加 1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻，
將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1:2 到
1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
A2、懸浮細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm
離心 5min；
2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管
中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）
3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小時(shí)以上。
產(chǎn)品名稱 38C13 小鼠 B 淋巴瘤細(xì)胞
生長特性 半貼壁半懸浮
凍存條件 無血清凍存液
培養(yǎng)體系 1640+10%FBS+1%雙抗
傳代方法 第一次建議 1:2 傳代
傳代情況 2~3 天換液/傳代
備注
懸浮細(xì)胞離心收集，請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液！ 貼壁細(xì)胞，請按貼壁細(xì)胞處理。
B1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考如下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1-2ml 至培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2min，然后 在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加 5ml 以上完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，在 1000RPM 條件 下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25 瓶），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/ 瓶，最后放入到 37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
B2、貼壁細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后 加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管 中，1000rpm 離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml 的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍 存管中。
細(xì)胞復(fù)蘇：
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直 至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種至 T25 培養(yǎng)瓶，放于 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
四、注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正
�，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后
期對比培養(yǎng)），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)
基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩
個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
