大鼠前白蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)定大鼠血清和血漿樣本中的前白蛋白。僅供研究使用。不用于診斷程序。

大鼠前白蛋白ELISA（ALP-41-PALRT-E01）檢測(cè)原理：

在這種檢測(cè)中，樣本中存在的前白蛋白與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗前白蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，添加與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗前白蛋白抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的前白蛋白形成復(fù)合物。在另一個(gè)洗滌步驟之后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），對(duì)結(jié)合的酶進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)合的酶量與被測(cè)試樣本中前白蛋白的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣本中前白蛋白濃度的量度。測(cè)試樣本中的前白蛋白量可以從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣本稀釋進(jìn)行校正。

樣本收集和處理：

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。在處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣本出現(xiàn)凝血、嚴(yán)重溶血、脂血，或?qū)�樣本的完整性有疑慮，請(qǐng)做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。下面列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件是作為一般指導(dǎo)。尚未評(píng)估樣本的穩(wěn)定性。

1血清樣本 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血液凝固后，應(yīng)通過(guò)離心分離血清。取出血清并立即檢測(cè)或分裝樣本并儲(chǔ)存在-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

2血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即檢測(cè)或分裝樣本并儲(chǔ)存在-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

3已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

試劑準(zhǔn)備：

在使用前，將所有試劑平衡至室溫（16°C至25°C）。

1稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）按1:5稀釋。

2洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）按1:20稀釋。在儲(chǔ)存溫度較低時(shí)，濃縮液中出現(xiàn)結(jié)晶并不罕見(jiàn)。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

3酶-抗體結(jié)合物 - 為每個(gè)微孔板測(cè)試條計(jì)算所需的工作結(jié)合物溶液量，為每個(gè)用于測(cè)試的測(cè)試條添加10微升酶-抗體結(jié)合物至990微升1X稀釋液中。均勻但輕柔地混合，避免產(chǎn)生泡沫。

4大鼠前白蛋白ELISA微孔板 - 按提供的狀態(tài)準(zhǔn)備使用。打開(kāi)鋁箔袋，從袋中取出微孔板。取出在檢測(cè)中不會(huì)使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑一起放回。

5大鼠前白蛋白校準(zhǔn)品 - 根據(jù)特定批次的分析證明書(shū)進(jìn)行準(zhǔn)備。

結(jié)果計(jì)算：

1. 從所有孔的值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)取平均值，并使用這些結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合將不夠精確。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值樣本值。根據(jù)稀釋因子進(jìn)行校正，以得出原始樣本中的前白蛋白濃度。

附錄A - 參考血清信息：

此試劑盒中包含一瓶參考血清。請(qǐng)參閱隨附的產(chǎn)品概況表以獲取特定批次的信息。請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)：

1. 收到參考血清后應(yīng)立即冷凍。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，它在有效期前都是穩(wěn)定的。

2. 應(yīng)適當(dāng)稀釋參考血清，以適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)范圍曲線。有關(guān)說(shuō)明，請(qǐng)參考協(xié)議中的“樣本稀釋”部分。

3. 在移液樣本（程序部分）時(shí)，也應(yīng)以雙份移液參考血清。