【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：雞禽流感病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T/盒

ELISA【預(yù)期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害國(guó)內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)的一種急性接觸性病毒性傳染病。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感發(fā)生的最有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對(duì)禽流感病毒的抵抗力。

    本試劑盒適用于不同品種、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測(cè)�？捎糜谇萘鞲校ㄈ�病毒）疫苗免疫效果評(píng)價(jià)、免疫時(shí)間的確定分析、地區(qū)雞群禽流感免疫狀況評(píng)價(jià)等。

【原    理】

本試劑盒系由預(yù)包被禽流感病毒（AIV）重組抗原的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)雞血清或血漿中禽流感病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在包被板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽流感病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。

【儲(chǔ)存及有效期】

于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，使用期限為1個(gè)月。

【試劑盒組成】

【樣品制備】  取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品短期可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入495μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗(yàn)操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量微孔板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰性/陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性/陽(yáng)性對(duì)照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A450）。

【結(jié)果判定】

1.陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔A值≤0.10；

2.陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔A值≥0.6；

3.臨界值（C.O）的計(jì)算：C.O=0.13+陰性對(duì)照孔均值（陰性對(duì)照孔均值低于0.07時(shí)以0.07計(jì)算）；

4.結(jié)果判定：樣品A值≥C.O為陽(yáng)性；樣品A值＜C.O為陰性。

ELISA試劑盒【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。