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發(fā)布時(shí)間：2024/11/6 9:40:47 閱讀次數(shù)：148
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有食用淀粉植物源性成分。現(xiàn)代食品加 工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官 鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于 基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品 是根據(jù)探針?lè)晒舛?/span> PCR 原理開(kāi)發(fā)的食用淀粉植物源性成分檢測(cè)試劑盒，它具有下列 特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物等組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏度高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)食用淀粉植物源性成分 DNA 序列高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì) 跟其他生物樣本的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5 個(gè)數(shù) 量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?/span> PCR 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號(hào) | 規(guī)格 |
| 2 × Probe qPCR Mix | GZ020701 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 熒光模板稀釋液 | GZ070407 | 1 mL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物-探 針混合液 |
GZ01518426yp |
260 μL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽(yáng)性對(duì) 照(1×10E8 拷貝/μL) |
GZ01518426pc |
50 μL |
保存條件
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
使用方法
一、DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個(gè)樣品待提取，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的是 PC（樣品制 備陽(yáng)性對(duì)照）和 NC（樣品制備陰性對(duì)照）�？梢匀￡�(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液 10μL 再加 上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為 PC 。另外用水作為 NC。
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA ，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽(yáng)性對(duì)照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供) ，充分震蕩 1 分鐘， 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得) ，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得) ，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無(wú)需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將陽(yáng)性對(duì)照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。
三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
若有 N 個(gè)待檢樣品，準(zhǔn)備 N+2 個(gè) qPCR 管(N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)陰性對(duì)照+6 個(gè)陽(yáng)性對(duì) 照) ，向各 qPCR 管中分別加入下列成分。
| 成分 | N 個(gè) 待檢樣品管 | qPCR 陰性對(duì)照 | qPCR 陽(yáng)性對(duì)照 |
| 2 × Probe qPCR Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物- 探針混合液 | 各 5 μL | 5 μL | 5 μL |
轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)。
四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 ul 模板，順序?yàn)殛幮詫?duì)照（DEPC-H2O）、待測(cè)樣品模板、 食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽(yáng)性對(duì)照，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
五、擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴(kuò)增儀器樣品槽相應(yīng)位置，進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：
| 過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
| qPCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 20 sec | |
| 信號(hào)通道 | FAM 通道采集熒光信號(hào) | |
六、結(jié)果分析
1. 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct值為縱軸，繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，推算出其濃 度。
2. 如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果：
陽(yáng)性對(duì)照（1×10E5 拷貝/μL）結(jié)果：Ct 值<30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，呈典型的 S 型曲線。 陰性對(duì)照結(jié)果：Ct 值>40 或無(wú) Ct值，無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
樣本檢測(cè)結(jié)果：Ct 值<38，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，表明樣本中檢測(cè)出食用淀粉植物源性成 分，結(jié)果為陽(yáng)性；Ct 值>40 或無(wú) Ct值，表明樣本中未檢測(cè)出食用淀粉植物源性成分，結(jié) 果為陰性；Ct 值在 38-40 范圍，應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)檢，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Ct值仍在 38-40 范 圍，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
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