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人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)說明書

發(fā)布時間:2023/3/23 9:47:14      閱讀次數(shù):605

人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)說明書

一 細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞名稱

人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液(貨號:C7001)

培養(yǎng)體系

DMEM+10%FBS+1%雙抗

傳代方法

第一次建議1:2傳代 

傳代情況

2天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡對比培養(yǎng)

如對比培養(yǎng)效果不好,建議直接購買我們的完全培養(yǎng)基

二 細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法.收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理.顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好.傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對比培養(yǎng),換液后將蓋子擰松

三 細(xì)胞培養(yǎng)步驟人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)說明書

a 細(xì)胞傳代如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣 鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次.

2. 添加0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化.

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之完全脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL完全培養(yǎng)重懸.

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25瓶),補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃ 5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng).

b 細(xì)胞凍存:

1 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2 添加0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中.

4 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放24小時以上轉(zhuǎn)入液氮罐中.

C 細(xì)胞復(fù)蘇:

1 從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2 將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3 棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種T25培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4 第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).

注意事項(xiàng):有些細(xì)胞貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正,F(xiàn)象.如脫離較多可按此方法:將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應(yīng).再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸.然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25),補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng).

售后條款:人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)說明書

1)細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);

2. 細(xì)胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

5. 細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā).技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費(fèi)重發(fā).

2細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定. 人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)說明書


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