EOL-1人急性髓系白血病細胞

培養(yǎng)說明書

一 細胞培養(yǎng)條件

二 細胞收到后處理

 收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài).接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100×,200×各一張）,觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況.作為我方進行售后的依據(jù).

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法.收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時.鏡下觀察：未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟.

三 細胞培養(yǎng)步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/font>6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜）.第二天換液并檢查細胞密度.

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng).

1 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中.

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中.

PS：若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進行傳代（方法同上）.

 EOL-1人急性髓系白血病細胞培養(yǎng)說明書

3）細胞凍存：

1 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次；

2 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min；

3 用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中；

4 先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃.

四 售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)；

2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結果,核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片）,重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā)；

5. 細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,并跟技術人員溝通的,由技術人員判定為我方責任的,重發(fā).技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā).

二）細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā)；

7. 視具體情況而定. 

注：由于細胞狀態(tài)受環(huán)境 操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后是需收到細胞期間間隔時間不能大于7天.

一 細胞培養(yǎng)條件

二 細胞收到后處理

 收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài).接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100×,200×各一張）,觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況.作為我方進行售后的依據(jù).

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法.收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時.鏡下觀察：未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟.

三 細胞培養(yǎng)步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/font>6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜）.第二天換液并檢查細胞密度.

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng).

1 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中.

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中.

PS：若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進行傳代（方法同上）.

3）細胞凍存：

1 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次；

2 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min；

3 用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中；

4 先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃.

四 售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)；

2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結果,核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片）,重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā)；

5. 細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,并跟技術人員溝通的,由技術人員判定為我方責任的,重發(fā).技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā).

二）細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā)；

7. 視具體情況而定. 

注：由于細胞狀態(tài)受環(huán)境 操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后是需收到細胞期間間隔時間不能大于7天.

 EOL-1人急性髓系白血病細胞培養(yǎng)說明書