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發(fā)布時(shí)間：2023/5/29 8:56:08 閱讀次數(shù)：975
容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7- 在培養(yǎng)過程中你是否遇到過細(xì)胞突然長出“小角”？這個(gè)到底是什么？ - 其實(shí)這個(gè)“小角”俗稱細(xì)胞的“偽足”是細(xì)胞分化導(dǎo)致的,雖然不影響細(xì)胞生長,但會(huì)影響到后期實(shí)驗(yàn)效果.那該如何避免它的發(fā)生,我們一起來研究一下.
培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S
首先觀察下分化和不分化的生長形態(tài)是怎樣的？ Raw264.7（未分化前）圖1 RAW264.7（分化后）圖2 僅供參考 圖1 為細(xì)胞正常形態(tài)呈不規(guī)則圓形,貼壁生長,未見觸角 圖2 可以清晰看見細(xì)胞長出長長的角,可見細(xì)胞已經(jīng)分化 容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7如何收起他的小脾氣？ 培養(yǎng)注意事項(xiàng) 01 ｜該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化,長時(shí)間的胰酶消 化會(huì)使細(xì)胞分化,長出偽足,小脾氣就冒出來啦！ 02 ｜傳代時(shí)使用無菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中. 03 ｜傳代比例,盡量使細(xì)胞密度高于30%. 04 ｜需使用較好的血清來進(jìn)行培養(yǎng).
正確的傳代步驟 01 ｜用無菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落 02 ｜將刮下來的細(xì)胞用15ml離心管離心收集 03 ｜1000rpm 離心5分鐘 04 ｜去上清,用新鮮的完全培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸 05 ｜按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中 小知識 RAW 264.7細(xì)胞系的起源 加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系.他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞.RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒）,對LPS非常敏感.該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志. 容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7
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