發(fā)布時間：2024/11/8 8:53:30 閱讀次數(shù)：154
產(chǎn)品及特點
嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒可用于檢測嗜肺巴斯德桿菌.嗜肺巴斯德桿菌(Pasteurella pneumophila)在自 然界中分布廣泛,它有兩種生物型,主要感染嚙齒類動物,對實驗小鼠 大鼠和豚鼠的危 害較大.嗜肺巴斯德桿菌作為一種條件致病菌,能夠引起免疫缺陷動物或免疫功能低下的 動物產(chǎn)生嚴重的肺炎,并可能導(dǎo)致動物死亡.本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的嗜肺巴斯德 桿菌檢測試劑盒,它具有下列特點：
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板.
2. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品.
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)嗜肺巴斯德桿菌 DNA 高度保守區(qū)設(shè)計, 不會跟除此之外的其它生物樣本 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng).
4. PCR mix 中含上樣染料,擴增反應(yīng)后可以直接上樣電泳.
5. 嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的PCR 反應(yīng).
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,不能用于定量.
7. 本產(chǎn)品只能用于科研.
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
| 2×Taq PCR Master Mix | GZ020101 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 引物混合液 | GZ01345668yw | 60 μL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照 (1×10E5 拷貝/μL) |
GZ01345668pc |
50 μL |
保存條件
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年.陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試 劑.
使用方法
一 DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取反應(yīng),多出的兩個中一個是 PC （樣品制備陽性對照）,一個是 NC（樣品制備陰性對照）.可以用 10μL 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照（1×10E5 拷貝/μL,本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對 照（加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）.可以用水 作為制備的陰性對照.
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容.建議使用細菌基因組 DNA 提取試劑盒（Cat: GZ01201-50）提取 DNA.
二 試劑配制(試劑準備區(qū))
準備足量的 PCR 管（樣品管 陰性對照管 陽性對照管）,向各 PCR 管中分別加入 下列成分.
| 成分 | N 個 待檢樣品管 | PCR 陰性對照 | PCR 陽性對照 |
| 2×Taq PCR Master Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 引物混合液 | 各 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| DEPC-H2O | 7 μL | 7 μL | 7 μL |
轉(zhuǎn)移至模板添加區(qū).
三 添加模板(模板添加區(qū))
向 PCR 管中分別加入 2uL 模板,順序為陰性對照（DEPC-H2O） 待測樣品模板 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照,離心 30 秒,立即進行擴增反應(yīng).
四 擴增反應(yīng)(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 PCR 管放置在 PCR 擴增儀器樣品槽相應(yīng)位置,進行擴增,擴增程序如下：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
|
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 55℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 15 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min |
五 電泳檢測
取 5-10 μL PCR 產(chǎn)物.電泳檢測 PCR 產(chǎn)物.本產(chǎn)品提供的 2×Taq PCR Master Mix 含 染料,在擴增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer.
嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒樣本檢測結(jié)果：凝膠電泳圖譜中有 374-377bp 條帶,表明該樣本含有嗜肺巴斯德桿 菌,結(jié)果為陽性；無 374-377bp 條帶,該樣本不含嗜肺巴斯德桿菌,結(jié)果為陰性.
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