傳代方法	第一次建議1:2傳代	凍存條件	細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液
細(xì)胞描述	STR鑒定正確 這株細(xì)胞源自胸水。沒(méi)有病毒顆粒。亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒，肝糖原顆粒，大溶酶體，成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲。SK-BR-3細(xì)胞株過(guò)表達(dá)HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物。 倍增時(shí)間：48-72 hours 致瘤性：Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma. 受體表達(dá)情況：Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18 保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; HTB-30 DSMZ; ACC-736 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
培養(yǎng)備注	1. SK-BR-3細(xì)胞從冷凍保存中恢復(fù)的速度可能很慢。SK-BR-3細(xì)胞在低溫保存恢復(fù)過(guò)程中的附著會(huì)很輕。這很正常。這種細(xì)胞系在培養(yǎng)的整個(gè)第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細(xì)胞，這并不少見(jiàn)； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生長(zhǎng)的第一周，在啟動(dòng)復(fù)蘇后幾天內(nèi)保持細(xì)胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物，用臺(tái)盼藍(lán)檢查生存能力。通過(guò)輕輕離心保留漂浮細(xì)胞，并在更換培養(yǎng)基時(shí)將其與附著的細(xì)胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中，這一點(diǎn)很重要。不要分離或丟棄漂浮細(xì)胞。細(xì)胞最初以小斑塊或細(xì)胞群的形式附著，許多細(xì)胞團(tuán)仍處于懸浮狀態(tài)。幾天后，生長(zhǎng)將從貼壁細(xì)胞群向外延伸。通常也會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)胞碎片。漂浮細(xì)胞應(yīng)始終通過(guò)溫和離心（125xg，持續(xù)5-7min）保留，并在換液或傳代后放回培養(yǎng)容器； 3. SK-BR-3細(xì)胞傾向于相互堆積。在細(xì)胞達(dá)到70-80%匯合度之前不要用胰酶消化處理細(xì)胞。如果讓細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)，細(xì)胞就會(huì)分離漂浮。

細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話(huà)，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

3、細(xì)胞凍存：（注：非無(wú)血清凍存液方法，無(wú)血清凍存液方法請(qǐng)參考我司官網(wǎng)貨號(hào)：C7001）

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。