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炭疽芽孢桿菌PCR試劑盒

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產(chǎn)品及特點(diǎn)

炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis) 屬于芽孢桿菌屬,是引起某些家畜、野獸和人類(lèi)炭疽。ㄈ诵蠊不迹┑牟≡0l(fā)病率最高的是牛羊,豬也可發(fā)生,人常因屠宰、食用或與病死畜接觸而感染。炭疽桿菌對(duì)社會(huì)公共衛(wèi)生和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的危害,迄今仍占相當(dāng)大的比重。由該菌引起的炭疽病幾乎遍及世界各地,四季均可發(fā)生,因此快速檢測(cè)炭疽芽孢桿菌具有重要意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開(kāi)發(fā),它具有下列特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供細(xì)菌DNA模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專(zhuān)一性強(qiáng),只擴(kuò)增炭疽芽孢桿菌。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。

5. 試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

 

規(guī)格及成分

成  份

編號(hào)

十孔包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL(亮黃蓋

超純水

100935

1 mL(藍(lán)色)

炭疽芽孢桿菌PCR引物混合液

13-25410yw

100 μL(白

炭疽芽孢桿菌PCR陽(yáng)性對(duì)照

13-25410pc

100 μL(黃

天凈沙DNA釋放劑試用裝

130982

50次(試用裝)

使用手冊(cè)

13-25410sc

1份

 

 

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。

 

自備試劑

樣品DNA。

 

使用方法

一、樣品DNA的制備

1. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟次制備要求的體積一樣,以此作為PC另外用水作為NC。

2. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的細(xì)菌DNAout細(xì)菌DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送50次免DNA提取的天凈沙DNA釋放劑,本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板,省略了DNA提取步驟。

二、設(shè)置PCR反應(yīng)(40 μL體系)

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:

成分

N+2個(gè)

樣品

PCR陰性對(duì)照

PCR陽(yáng)性對(duì)照

PCR MagicMix 3.0

各20 μL

20 μL

20 μL

炭疽芽孢桿菌 PCR引物混合液

各2 μL

2 μL

2 μL

N+2個(gè)樣品DNA模板

各18 μL

-

-

樣品制備陰性對(duì)照

-

18 μL

-

樣品制備陽(yáng)性對(duì)照

-

-

18 μL

4. 下表設(shè)置PCR反應(yīng):

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94

5 min

PCR反應(yīng)

(35個(gè)循環(huán))

94

20 sec

50

20 sec

72℃

30 sec

最后延伸

72

10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取10-20 μL PCR產(chǎn)物。電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加loading buffer。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為208bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋10倍后重復(fù)PCR擴(kuò)增以排除PCR抑制劑的感染。

 

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

炭疽芽孢桿菌可視化LAMP擴(kuò)增試劑盒

 

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