產(chǎn)品及特點(diǎn)
用絕大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法從土壤或湖海沉積物中提取的 DNA 都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用天澤基因的土壤 DNAOUT 從泥碳（腐殖酸含量超過(guò) 50%） 等腐殖酸豐富的土壤樣品中提取的 DNA 也有腐殖酸污染，它們往往對(duì) PCR 等后續(xù)反應(yīng)有極大的抑制作用。本產(chǎn)品從天澤基因柱式 DNABACK 改進(jìn)而得，專(zhuān)門(mén)用于從土壤 DNA 樣品中清除腐殖酸污染。
1.去污染效果好，能使腐殖酸的濃度降低 10 倍以上。
2.DNA 回收率高，一般都在 80%以上。
3.操作過(guò)程簡(jiǎn)單快速，只需要 10 分鐘。
4.擴(kuò)容性好，可小規(guī)模操作，也可以大規(guī)模操作。
5.處理后的樣品原液或稍微稀釋后即可用于 PCR。
運(yùn)輸及保存：常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。
自備試劑：無(wú)
使用方法
1.活化離心吸附柱：將 0.7 mL 吸附柱活化液加入到離心吸附柱中，套上套管后靜置 2 分鐘，室溫 13000 g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的液體。套上套管后再短暫離心半分鐘后倒棄穿透液。套上套管后待用。已經(jīng)活化的離心吸附柱最好當(dāng)天使用。
2.將 600 mL 專(zhuān)用上柱液與不超過(guò) 100 uL 的含腐殖酸的 DNA 溶液輕柔混勻。如果DNA 溶液體積超過(guò) 100 uL, 專(zhuān)用上柱液的體積需按 1:6 (DNA 溶液:專(zhuān)用上柱液) 的比例相應(yīng)增加。本試劑盒多提供了 7mL 上柱液供此情況下使用。如果需要更多上柱液，則需要另購(gòu)。
3.將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，放于離心管架上，靜置3-5 分鐘。
4.室溫 13000 g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的液體。若一次加不完，可分兩次加入并離心。
5.加入 0.5 mL 通用洗柱液于吸附柱中，13000 g 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。
6.重復(fù)上步洗滌操作 1 次。
7.13000 g 離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體（含乙醇）。
8.將離心柱置于一新的干凈的離心管（自備）中，加入 50 uL DNA 洗脫液 3.0， 并靜置 3-5 分鐘。
9.12000-15000 g 離心 1 分鐘，離心管底部所得溶液即為純化的 DNA 溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放冰箱長(zhǎng)期保存。
圖注：從泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本產(chǎn)品處理前(B)和處理后(A)的 顏色對(duì)比。
處理前OD340為4.0（4為所用分光光度計(jì)的上限，實(shí)際讀數(shù)可能遠(yuǎn)高于4），處理后降低到0.3。處理前的原液、10倍和100倍稀釋液均無(wú)PCR擴(kuò)增，而處理后均可以擴(kuò)增。
Q：本產(chǎn)品與柱式DNABACK 有何區(qū)別？
A：本產(chǎn)品由柱式DNABACK 改進(jìn)而來(lái)，主要區(qū)別一是使用了不同的上柱液，減少了硅膠膜對(duì)DNA 的非特異吸附，更適用于微量DNA 樣品；二是上柱液中含有腐殖酸去除試劑，適合于土壤DNA 樣品。
Q：在用土壤DNA 進(jìn)行細(xì)菌專(zhuān)一性PCR 時(shí)，為何沒(méi)加DNA 模版的陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)？
A：這是由于使用的 Taq DNA 聚合酶一般從 E.coli 表達(dá)菌株中提取，提取過(guò)程中污染了 E.coli 的基因組 DNA，而使用的廣譜細(xì)菌專(zhuān)一性引物可以識(shí)別所有細(xì)菌DNA 基因組DNA 模版，所以會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增。建議使用高質(zhì)量的Taq DNA 聚合酶。
