| 產(chǎn)品及特點(diǎn) | 柱式植物RNA提取試劑盒（柱式植物RNAout）（不含DNA酶）是基因植物 RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升級產(chǎn)品，它結(jié)合了植物 RNAOUT 的高效性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗(yàn)證，植物名單見植物RNAOUT 產(chǎn)品介紹的附錄)和天澤基因柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下： 1. 操作更加簡單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘，比植物 RNAOUT 快一倍。 2. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。 3. 適用于所有用植物 RNAOUT 能提出 RNA 的植物(注:對有些植物可能需要在溶液 A 中額外添加 RVC)。 4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。 5. 性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。 6. 由于小 RNA 太短很難上柱，故如果要提取小 RNA 需要用本公司專門的試劑盒。 | ||||
| 規(guī)格及成分 |
| 成 份 | 編 號 | 大紙盒包裝 |
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| 柱式植物 RNA 提取溶液 A | 71203a | 50 mL | |||
| 柱式植物 RNA 提取溶液 B | 71203b | 15 mL | |||
| 柱式植物 RNA 提取溶液 C | 71203c | 50 mL | |||
| 離心吸附柱 | 60911 | 50 套 | |||
| 通用洗柱液 | 60408 | 50 mL | |||
| RNA 洗脫液 | 71207 | 10 mL | |||
| 使用手冊 | 71203sc | 1 份 | |||
| 注：溶液 B 為淡黃色液體，使用前請觀察顏色是否正常。若溶液 B 有油粒狀顆 粒及分層，屬正�，F(xiàn)象，不影響使用。 | |||||
| 運(yùn)輸及保存 | 常溫運(yùn)輸和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。 | ||||
| 自備試劑 | 氯仿。 | ||||
| 使用方法 | 1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物葉片、或 50-100 mg 植物種子、或 200-500 mg 植物果實(shí)。 2. 樣品破碎： 1) 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在 RNALOCKER 中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER 液體后再剪切成小塊)，放入 10-15 mL 塑料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻 | ||||
漿時(shí)會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。
2) 液氮研磨法（適用于復(fù)雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到合適的塑料離心管中，加入 1 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 A，立即劇烈振蕩20 秒，充分混勻。
注意：溶解柱式植物 RNA 提取溶液 A 沉淀。柱式植物 RNA 提取溶
液 A 在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織（比如果實(shí)）含有大量水份，勻漿液會多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取 1 mL。
4. 在離心管中加入 0.3 mL 的柱式植物 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自備氯仿，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。
5. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，兩相間將有約 5-10 毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有 DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。最好留下100 μL 上清液不取。
7. 加入等體積的柱式植物 RNA 提取溶液 C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)
生（對某些植物，屬于正�，F(xiàn)象），千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液（如果有沉淀，則先混勻） 轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中， 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第 7 步加入柱式植物 RNA 提取溶液 C 后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三
次，每次加入的通用洗滌液的量分別為 0.4、0.3 和 0.3 mL。
11. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 μL RNA 洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。
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| 13. 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。 14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子 （BioTechniques，28：414，2000）。如果電泳發(fā)現(xiàn) DNA 污染嚴(yán)重（跟 樣品相關(guān)）建議使用含有 RNase-free DNase 處理步驟的柱式植物RNAout 2.0 （ CAT#:90404 ）， 也可以另購膜結(jié)合 DNA 清除劑 （CAT#90904）升級成柱式植物 RNAout 2.0。 15. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 溶于TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出RNA 濃度（1 OD260 的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。 16. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分 別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。 |
| 關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 | 柱式植物 RNAout 2.0（CAT#:90404）、膜結(jié)合 DNA 清除劑（CAT#90904） |
