Thermostable RNase H，即耐熱RNase H，是一種在較高溫度(65℃以上)時仍然保持活性的核糖核酸內(nèi)切酶(endoribonuclease)。Thermostable RNase H可以選擇性識別并酶切RNA:DNA雜合雙鏈中的RNA的磷酸二酯鍵，同時雜合雙鏈中的DNA會保持完整。Thermostable RNase H不會降解單鏈或雙鏈的RNA或DNA。

Thermostable RNase H在65℃以上溫度時仍具有很高的酶活性，其在70℃時的半衰期可達(dá)幾個小時，在高達(dá)95℃時的半衰期仍可達(dá)30分鐘左右。 該酶的耐高溫特性使得異源雙鏈RNA:DNA雜交分子具有更高的特異性，并在較高溫度下更特異性地降解雜合雙鏈中的RNA。Thermostable RNase H具有與常見的E. coli RNase H具有類似的酶學(xué)性質(zhì)，但E. coli RNase H在高于55℃時即失活。

Thermostable RNase H與E. coli RNase H的熱穩(wěn)定性比較請參考圖1。

圖1. R7090 Thermostable RNase H與E. coli RNase H的熱穩(wěn)定性比較。在20µl反應(yīng)體系中加入圖中指定量的Thermostable RNase H或E. coli RNase H，在65℃孵育20min后，Thermostable RNase H和E. coli RNase H分別按照其標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)條件(Thermostable RNase H 50℃孵育20min；E. coli RNase H 37℃孵育20min)進(jìn)行RNA:DNA雜交鏈的酶切反應(yīng)，反應(yīng)完畢后立即冰浴3-5分鐘并加入1μl 0.5M EDTA終止反應(yīng)。取出5μl反應(yīng)液，加入1μl 6×DNA Loading Buffer，然后進(jìn)行15%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(冰浴條件下180V電泳45min；之后用NA-Red (D0128 NA-Red (EB升級換代產(chǎn)品, 2000X))室溫染色15min，即可拍照觀察結(jié)果)。如圖所示，E. coli RNase H在65℃時失去活性，而Thermostable RNase H在65℃時仍保持活性。熱穩(wěn)定性比較反應(yīng)體系(20μl)：Thermostable RNase H：50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA雜合雙鏈以及不同量的Thermostable RNase H (包括未經(jīng)熱處理和在65℃孵育20min熱處理)，50℃孵育20min；E. coli RNase H：20mM Tris-HCl (pH 7.8), 40mM KCl, 8mM MgCl2, 1mM DTT, 400ng RNA:DNA雜合雙鏈以及不同量的E. coli RNase H (包括未經(jīng)熱處理和在65℃孵育20min熱處理)，37℃孵育20min。

Thermostable RNase H催化降解RNA:DNA雜合雙鏈中的RNA鏈的效果請參考圖2：

圖2. 碧R7090 Thermostable RNase H和競爭公司的同類產(chǎn)品的效果比較圖。使用本產(chǎn)品或N公司(Competitor)的Thermostable RNase H，在20µl反應(yīng)體系中加入圖中指定量的本產(chǎn)品或國外N公司的Thermostable RNase H，50℃孵育20min進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢后立即冰浴3-5分鐘并加入1μl 0.5M EDTA以終止反應(yīng)。取出5μl反應(yīng)液，加入1μl 6×DNA Loading Buffer，然后進(jìn)行15%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(冰浴條件下180V電泳45min；之后用NA-Red (D0128 NA-Red (EB升級換代產(chǎn)品, 2000X))室溫染色15min，即可拍照觀察結(jié)果)。如圖所示，本產(chǎn)品與N公司的產(chǎn)品相比，具有類似的催化效果。RNA:DNA雜合雙鏈反應(yīng)體系(20μl)：50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA雜合雙鏈以及不同量的Thermostable RNase H，50℃孵育20min。

用途：高嚴(yán)謹(jǐn)度的RNA結(jié)構(gòu)圖譜的描繪和位點特異性RNA切割；與oligo (dT)雜交的mRNA的poly (A)尾的酶切去除；cDNA合成后去除mRNA；用于等溫擴(kuò)增實驗；用于和特定DNA序列雜交后酶切去除特定的RNA序列，例如rRNA的去除等。

來源：大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白。

活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1 nmol of ribonucleotides from 40 pmol of a fluorescently labeled 25 base pair RNA:DNA hybrid in a total reaction volume of 50 µl in 20 minutes at 50℃。

純度：純度大于95%，不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

酶儲存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.5), 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, 50% (v/v) Glycerol。

10XReaction Buffer：500mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃), 750mM KCl, 30mM MgCl2, 100mM DTT。

失活或抑制：加入適量蛋白酶K消化或加入5%體積的0.5M EDTA pH8.0。

包裝清單：

保存條件：

-20℃保存，至少一年有效。

注意事項：

本產(chǎn)品的最佳反應(yīng)溫度高于65℃，在95℃時仍具有活性，其在65℃時的活性是在37℃時的3-4倍。

本產(chǎn)品在使用說明中建議的反應(yīng)溫度是50℃，在實際實驗操作中可以酌情通過提高反應(yīng)溫度提高其酶活性。

本產(chǎn)品的反應(yīng)緩沖液中包含MgCl2，當(dāng)Thermostable RNase H在高溫時應(yīng)用于RNA/DNA雜交鏈或者RNA樣品時，建議適當(dāng)限制反應(yīng)時間和溫度，以減少金屬介導(dǎo)的單鏈RNA降解。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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