pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His是研發(fā)的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)C端帶有His標(biāo)簽(HHHHHHHH)人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(Angiotensin converting enzyme2，ACE2)的胞外N端肽酶結(jié)構(gòu)域(peptidase domain，PD) 1-615位的氨基酸所組成的蛋白，可以方便使抗His標(biāo)簽的抗體來識別ACE2(1-615)蛋白的表達(dá)，免疫共沉淀分析或者蛋白純化等。該質(zhì)粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)，質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
ACE2是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Rennin-angiotension system，RAS)的重要成員。血管緊張素(Angiotensin II，Ang II)是RAS系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和促進(jìn)炎癥因子表達(dá)的作用。ACE2主要是通過降解血管緊張素II生成血管緊張素1-7(angiotensin-(1-7))從而發(fā)揮機體保護(hù)功能。ACE2是在肺、心臟、腎臟和腸中表達(dá)的I型膜蛋白，其胞外域包括N端肽酶結(jié)構(gòu)域(Peptidase domain，PD)及C端Collectrin-like結(jié)構(gòu)域(CLD)。ACE2是SARS冠狀病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人類呼吸道冠狀病毒NL63的受體。SARS-CoV/SARS-CoV-2通過其Spike蛋白受體結(jié)合域(Receptor binding domain，RBD)與ACE2的肽酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，參與病毒的感染過程。SARS-CoV-2 Spike蛋白與ACE2的親和力是SARS-CoV Spike蛋白與ACE2的親和力的10-20倍。
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 232-819 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 863-882 |
| Multiple cloning site | 895-922 |
| ACE2(1-615) | 923-2767 |
| His-tag | 2768-2791 |
| BGH pA | 2838-3062 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 3108-3536 |
| SV40 promoter | 3541-3884 |
| Neomycin resistance ORF | 3946-4740 |
| SV40 polyA signal | 4914-5044 |
| pUC origin | 5427-6097 |
| Ampicillin resistance ORF | 6242-7238 |
| bla promoter | 7137-7143 |
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His質(zhì)粒(7238bp)的圖譜如下：
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的多克隆位點的詳細(xì)圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His.pdf
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His)包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 917 | NruI | TCG|CGA | 208 |
| AflII | C`TTAA,G | 908 | PaeR7I | C`TCGA,G | 2795 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2811 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4192 |
| AvrII | C`CTAG,G | 3864 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1965 |
| BamHI | G`GATC,C | 1992 | PluTI | G,GCGC`C | 4077 |
| BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 6820 | PshAI | GACNN|NNGTC | 2751 |
| BmtI | G,CTAG`C | 899 | PspOMI | G`GGCC,C | 2807 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 3933 | PspXI | VC`TCGA,GB | 2795 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4471 | PvuI | CG,AT`CG | 6685 |
| BstBI | TT`CG,AA | 4756 | RsrII | CG`GWC,CG | 4590 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 5046 | SacI | G,AGCT`C | 818 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 626 | SacII | CC,GC`GG | 1579 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 3341 | SfoI | GGC|GCC | 4075 |
| EagI | C`GGCC,G | 3980 | SmaI | CCC|GGG | 3887 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 816 | SnaBI | TAC|GTA | 590 |
| EcoRI | G`AATT,C | 2722 | SpeI | A`CTAG,T | 249 |
| KasI | G`GCGC,C | 4073 | TspMI | C`CCGG,G | 3885 |
| KpnI | G,GTAC`C | 921 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4192 |
| MluI | A`CGCG,T | 228 | XbaI | T`CTAG,A | 2801 |
| MscI | TGG|CCA | 4156 | XhoI | C`TCGA,G | 2795 |
| NarI | GG`CG,CC | 4074 | XmaI | C`CCGG,G | 3885 |
| NheI | G`CTAG,C | 895 |
pcDNA3.1-ACE2(1-615)質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'
BGH pA primer (2832-2849): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的全序列信息：D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His序列.txt。
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞后的表達(dá)效果請參考圖1:
圖1：Western blot實驗檢測SARS-CoV-2 ACE2(1-615)基因在HEK293T細(xì)胞的表達(dá)。1.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1空載質(zhì)粒；2.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His質(zhì)粒。使用碧Lipo8000™轉(zhuǎn)染試劑(C0533)將2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His質(zhì)粒轉(zhuǎn)染六孔板中密度為80%左右的HEK293T細(xì)胞，37℃恒溫培養(yǎng)48h后，棄掉孔內(nèi)培養(yǎng)液，PBS洗滌三遍后加入150µl Western及IP細(xì)胞裂解液(P0013)充分裂解，4℃離心，取上清用BCA法測蛋白濃度，然后經(jīng)濃度4-20%的預(yù)制膠(P0524)電泳，每孔蛋白總量20µg，轉(zhuǎn)膜、封閉后使用1:1000稀釋的His抗體(AH367)室溫孵育1h，洗滌后1:1000稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)(A0216)室溫孵育1h，最后經(jīng)BeyoECL Star(P0018AS)化學(xué)發(fā)光，并使用BeyoImager™ 600化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(EI600)拍照記錄。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D2951-1μg | pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His | 1μg |
| D2951-100μg | pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His | 100μg |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 首次使用1μg包裝的本產(chǎn)品時，請先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)�？梢酝ㄟ^酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過測序進(jìn)行鑒定。
2. 100μg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1μg/μl，共1ml�？梢灾苯佑糜诿盖谢蛘咿D(zhuǎn)染細(xì)胞。
