Lyso-Tracker Red是一種溶酶體(lysosome)紅色熒光探針，能通透細(xì)胞膜,可以用于活細(xì)胞溶酶體特異性熒光染色。

Lyso-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的DND-99進(jìn)行了熒光標(biāo)記的帶有弱堿性的熒光探針，其中僅弱堿可部分提供質(zhì)子，以維持pH在中性,可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于溶酶體的特異性熒光標(biāo)記。中性紅(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以對(duì)溶酶體進(jìn)行熒光染色，但中性紅和吖啶橙的染色缺乏特異性。Lyso-Tracker Red適用于活細(xì)胞溶酶體的熒光染色，但不適合用于固定細(xì)胞溶酶體的熒光染色。Lyso-Tracker Red分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)式參考圖1。
圖1.Lyso-Tracker Red的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。Lyso-Tracker Red的分子式為C20H24BF2N5O，分子量為399.25，最大激發(fā)波長為577nm，最大發(fā)射波長為590nm。Lyso-Tracker Red的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖2。
圖2.Lyso-Tracker Red的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。Lyso-Tracker Red是嗜酸性熒光探針，用于活細(xì)胞內(nèi)酸性細(xì)胞器的標(biāo)記和示蹤。這些探針具有幾個(gè)重要特征，包括高度選擇靶向酸性細(xì)胞器和在納摩爾濃度有效標(biāo)記活細(xì)胞。Lyso-Tracker Red必須在極低濃度(通常約50nM)下才能獲得優(yōu)異的選擇性。這些探針的滯留(retention)機(jī)制雖然沒有被研究清楚，但很可能與酸性細(xì)胞器的質(zhì)子化和滯留性有關(guān)，Lyso-Tracker Red探針的內(nèi)吞作用動(dòng)力學(xué)研究顯示染料進(jìn)入活細(xì)胞的攝入時(shí)間僅幾秒即可。然而，這些溶酶體探針會(huì)導(dǎo)致溶酶體被堿化，長期孵育會(huì)誘使溶酶體pH值的增加。因此，建議成像前用探針孵育細(xì)胞的時(shí)間不能太久。Lyso-Tracker Red探針具體使用濃度和孵育時(shí)間需要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件和具體細(xì)胞種類來進(jìn)行摸索以達(dá)到滿意的染色效果。Lyso-Tracker Red在活細(xì)胞中染色效果參考圖3。
圖3.Lyso-Tracker Red在HeLa細(xì)胞中的染色效果。Hoechst 33342染色的HeLa細(xì)胞其細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色熒光；Lyso-Tracker Red染色HeLa細(xì)胞的溶酶體，呈現(xiàn)紅色熒光。
Lyso-Tracker Red適用于活細(xì)胞溶酶體的熒光染色，但不適合用于固定細(xì)胞溶酶體的熒光染色。如果經(jīng)Lyso-Tracker Red染色后的細(xì)胞需要進(jìn)行固定操作，可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
按照1:20000的比例稀釋，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。
包裝清單：

保存條件：
-20℃避光保存，半年有效。
注意事項(xiàng)：
Lyso-Tracker Red (1mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對(duì)于微量的液體，每次使用前先離心數(shù)秒鐘，使液體充分沉降到管底。
熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
Lyso-Tracker Red適用于活細(xì)胞溶酶體熒光染色，但不適合用于固定細(xì)胞溶酶體的熒光染色。如果經(jīng)Lyso-Tracker Red染色后的細(xì)胞需要進(jìn)行固定操作，可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
需自備蓋玻片和載玻片(可以向雅吉生物訂購)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.Lyso-Tracker Red工作液的配制：
a.取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液或適當(dāng)?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中，使最終濃度為50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Red加入到20ml或13.33ml細(xì)胞培養(yǎng)液或適當(dāng)?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中。混勻后即為Lyso-Tracker Red工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向雅吉生物訂購。
b.Lyso-Tracker Red工作液使用前需37℃預(yù)溫育。
注：工作液中Lyso-Tracker Red的濃度可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。為降低背景，在染色效果可以接受的范圍內(nèi)，建議盡量使用較低濃度的Lyso-Tracker Red。
2.溶酶體的熒光標(biāo)記：
a.去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入步驟1配制好的并37℃預(yù)溫育的Lyso-Tracker Red染色工作液，與細(xì)胞37℃共孵育5-60分鐘。
b.去除Lyso-Tracker Red染色工作液，加入新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液。
c.隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。此時(shí)可觀察到溶酶體呈明亮的強(qiáng)熒光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的濃度或在推薦的時(shí)間范圍內(nèi)適當(dāng)延長染色時(shí)間。