溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit)是一種對溶酶體中酸性β-半乳糖苷酶(Acid β-Galactosidase)進行染色檢測的試劑盒，常用作細胞衰老檢測時的對照。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織中溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細胞的檢測，也可以用于組織切片的檢測。
絕大多數(shù)正常細胞都可以檢測到較高水平的溶酶體β-半乳糖苷酶活性水平。可以用作細胞衰老β-半乳糖苷酶染色時的參考染色。細胞衰老特異的β-半乳糖苷酶僅在衰老時表達，而溶酶體β-半乳糖苷酶幾乎在任何情況下都表達。
溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的催化下會生成深藍色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本產(chǎn)品染色后的HeLa細胞請參考圖1。
圖1. HeLa細胞使用本產(chǎn)品染色后的示例圖片。
本試劑盒僅染色溶酶體酸性β-半乳糖苷酶，不會染色衰老特異性的β-半乳糖苷酶，也不會染色外源轉(zhuǎn)染表達的用于報告基因的β-半乳糖苷酶(大腸桿菌的β-半乳糖苷酶)。
主要特點：本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，是同類產(chǎn)品中首創(chuàng)的能兼容普通的細胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質(zhì)的耗材、容器或玻璃容器進行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質(zhì)的容器或耗材，否則可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗觀察。即使嚴格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，對耗材或容器的材質(zhì)無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷。
圖2. 本試劑盒優(yōu)化前后的對比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管、多孔板等會產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。
如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0605-1 | β-半乳糖苷酶染色固定液 | 100ml |
| C0605-2 | X-Gal溶液 | 5ml |
| C0605-3 | β-半乳糖苷酶染色液A | 1ml |
| C0605-4 | β-半乳糖苷酶染色液B | 1ml |
| C0605-5 | β-半乳糖苷酶染色液C | 100ml |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項：
β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請?zhí)貏e小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
X-Gal溶液在-20ºC或4ºC保存會凍結(jié)，室溫或37ºC水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動即可完全融解。
β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正�，F(xiàn)象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
使用96孔板等多孔板進行檢測時，如果孵育過夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中最明顯的是四周細胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng)。邊緣效應(yīng)會導(dǎo)致細胞生長不均勻、細胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不一致、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過長時間，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應(yīng)；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實驗設(shè)計時，實驗樣品最好進行隨機分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。
需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 對于貼壁細胞：
a. 對于6孔板中培養(yǎng)的細胞，吸除細胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進行操作。
b. 吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。
c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。
| β-半乳糖苷酶染色液A | 10μl |
| β-半乳糖苷酶染色液B | 10μl |
| β-半乳糖苷酶染色液C | 930μl |
| X-Gal溶液 | 50μl |
d. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。
e. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
2. 對于懸浮細胞：
a. 離心收集細胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結(jié)成團塊。
b. 離心，吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。
c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
d. 37℃孵育過夜。
e. 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
3. 對于組織切片：
a. 對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。
b. 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。
c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。
d. 吸除PBS，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
e. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。最好把整個切片浸泡在染色工作液中。
f. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間
