生產(chǎn)的YO-PRO-1/RNase細胞核染色液 (YO-PRO-1/RNase Staining Solution for Nucleus)，簡稱YP1/RNase細胞核染色液，是一種使用DNA綠色熒光染料YO-PRO-1 (YP1)在死細胞或經(jīng)過通透處理的細胞中染色細胞核的染色液。本染色液染色后可以用于熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標(biāo)儀等熒光檢測。
YO-PRO-1，又名惡唑黃(Oxazole yellow)，簡稱YP1，是一種對正常動物細胞膜沒有通透性而對于凋亡與壞死細胞的細胞膜有通透性的DNA綠色熒光染料，常用于細胞凋亡與壞死的檢測。YO-PRO-1是一種非細胞膜穿透性的并對DNA具有高親和力的羰花青單體綠色熒光染料，在沒有與DNA結(jié)合的時候基本上沒有熒光，而與DNA結(jié)合后可以發(fā)出明亮的綠色熒光。在細胞凋亡發(fā)生時，細胞膜通透性發(fā)生改變，此時YO-PRO-1可以進入細胞內(nèi)與DNA結(jié)合，發(fā)出明亮的綠色熒光，因此YP1常和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)配合用于分析和鑒定凋亡和壞死細胞，也可以直接使用YO-PRO-1/PI細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(C1075)。
YP1/RNase細胞核染色液染色DNA后的最大激發(fā)光波長在491nm，最大發(fā)射光波長為509nm。由于YO-PRO-1熒光與其它熒光有很好的區(qū)分，所以非常適合用于多重?zé)晒饪贵w標(biāo)記時對細胞核進行染色。YP1/RNase細胞核染色液染色DNA后的激發(fā)光和發(fā)射光光譜參考圖1。
圖1. YO-PRO-1/RNase細胞核染色液染色DNA后的激發(fā)光和發(fā)射光光譜。
YP1/RNase細胞核染色液為即用型染色液，無須稀釋即可直接加入樣品中進行凋亡與壞死細胞或經(jīng)過通透處理的細胞的細胞核的染色，十分便捷。YP1/RNase細胞核染色液用于細胞核染色的效果參考圖2。RNase的存在可以充分消化細胞內(nèi)的RNA，使染色效果更佳。
圖2. YP1/RNase細胞核染色液對NRK-52E細胞的細胞核的染色效果。YP1/RNase細胞核染色液染色的NRK-52E細胞的細胞核呈綠色熒光(圖B)，Tubulin-Tracker Red (抗體法微管紅色熒光探針 C1050)染色的NRK-52E細胞的微管結(jié)構(gòu)見圖C，綠色熒光和紅色熒光的疊加(merge)的效果見圖D。注：NRK-52E細胞經(jīng)免疫染色固定液(P0098)固定后使用免疫染色強力通透液(P0097)通透。實驗檢測效果因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
本染色液的10ml和50ml包裝用于6孔板每孔檢測體系為500μl時分別可以檢測20次和100次；用于96孔板每孔檢測體系為100μl時可以分別可以檢測100次和500次。實際檢測次數(shù)會因為檢測體系的大小而有所不同。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C2025-10ml | YO-PRO-1/RNase細胞核染色液 | 10ml |
| C2025-50ml | YO-PRO-1/RNase細胞核染色液 | 50ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃避光保存，至少一年有效。4℃避光保存，至少6個月有效。
注意事項：
熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
實驗中所用到的免疫染色固定液(P0098)、免疫染色強力通透液(P0097)可以向訂購。
染色液中含有RNase酶，如果使用比較頻繁，可置于4℃保存，盡可能減少反復(fù)凍融。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
固定后細胞或切片的染色：
a.使用4%多聚甲醛固定液(P0099)或免疫染色固定液(P0098)對細胞進行固定，室溫固定10-15min。
b.吸除固定液，用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌細胞2-3遍。
c.選做：使用免疫染色通透液(P0096)或配制在PBS中的0.1% Triton X-100 (ST795)進行通透，室溫5min。然后用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌細胞2-3遍。如果用于染色凋亡或壞死細胞，則無需進行通透處理。
d.選做：按照免疫染色的方法進行抗體的孵育或用其它染料進行染色。
e.加入適當(dāng)體積的YP1/RNase細胞核染色液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞或樣品。
f.37℃避光孵育5-20min，以5min為初始孵育時間，后續(xù)可以根據(jù)實際染色效果對染色時間進行適當(dāng)調(diào)整和優(yōu)化，以得到更加理想的染色效果。
g.吸除YP1/RNase細胞核染色液，用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌2-3次，隨后即可在熒光顯微鏡下觀察或其它熒光檢測系統(tǒng)檢測。如果之前未經(jīng)過通透處理，并且希望區(qū)分凋亡和壞死細胞，可以使用碘化丙啶(PI)進行復(fù)染，PI染色陽性的為壞死細胞，YP1染色陽性的為凋亡與壞死細胞。
