阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0) (Alcian Blue & Nuclear Fast Red Staining Kit, pH1.0)是一種通過阿爾新藍(lán)對(duì)含有硫酸根(sulfated)的組織如硫酸化黏液物質(zhì)或強(qiáng)硫酸化黏液物質(zhì)(strongly sulfated mucosubstances)等進(jìn)行染色的試劑盒，同時(shí)提供核固紅進(jìn)行復(fù)染。本產(chǎn)品對(duì)不同組織的石蠟切片和冰凍切片均適用，也可用于血涂片和骨髓涂片的染色。
本試劑盒染色時(shí)無須額外的酸化操作步驟，染色步驟更加簡(jiǎn)單便捷。
阿爾新藍(lán)(Alcian Blue)，也稱阿爾新藍(lán)8G、阿利新藍(lán)或愛先藍(lán)，是一種類銅鈦花青共軛染料，最初用于紡織纖維染色。阿爾新藍(lán)的分子式為 C56H68N16S4Cl4Cu，分子量為1298.86，CAS號(hào)為33864-99-2，墨綠色結(jié)晶，有金屬光澤，溶于水。阿爾新藍(lán)屬于陽離子染料，中央含銅的酞菁環(huán)與四個(gè)異硫脲基通過硫醚鍵相連而成，異硫脲基呈中度堿性，使阿爾新藍(lán)帶陽離子。阿爾新藍(lán)使酸性物質(zhì)著色的機(jī)制尚不十分明確，一般認(rèn)為是陽離子的異硫脲基通過靜電與組織內(nèi)的多聚陰離子如酸性黏液物質(zhì)的羧基或硫酸根形成不溶性復(fù)合物，即染料分子中帶正電荷的鹽鍵和酸性黏液物質(zhì)中帶負(fù)電荷的酸性基團(tuán)結(jié)合呈藍(lán)色。
阿爾新藍(lán)是顯示酸性黏性物質(zhì)最特異的染料，所以阿爾新藍(lán)染色又可以稱為粘蛋白染色(mucin stain)。阿爾新藍(lán)染料與酸性黏液物質(zhì)中酸性基團(tuán)形成鹽鍵，利用染料的不同pH值，可區(qū)分酸性黏液物質(zhì)的類別：當(dāng)阿爾新藍(lán)染色液的pH值為1.0時(shí)，使含有硫酸根(sulfated)的組織如酸性硫酸化或強(qiáng)硫酸化黏液物質(zhì)染成藍(lán)色，而不能染色含有羧基的組織；當(dāng)阿爾新藍(lán)染色液的pH值為2.5時(shí)，也可以使結(jié)締組織或軟骨中含有羧基(carboxylated)的組織如唾液粘多糖蛋白(sialomucins)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid)及上皮酸性黏蛋白(epithelial acid mucin)等染為藍(lán)色，但對(duì)于含有硫酸根的組織，pH2.5的染色要弱于pH1.0；中性黏蛋白如胃黏膜和Brunner腺體部位的中性黏蛋白等不能與阿爾新藍(lán)反應(yīng)。核固紅染色液復(fù)染可使核染成粉紅色或紅色。阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0)染色后酸性黏性物質(zhì)和細(xì)胞核的顏色見下表：
| Samples | Color |
| 硫酸化黏液物質(zhì)(Sulfated Mucosubstances) | Blue |
| 細(xì)胞核(Nuclei) | Red |
| 背景(Background) | Pink |
本試劑盒染色靈敏度高，背景低，著色清晰分明，用于小鼠小腸組織染色效果參考圖1。
圖1.阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0)用于小鼠小腸組織的染色效果圖。如圖所示，硫酸化黏液物質(zhì)被染成藍(lán)色，細(xì)胞核被染成紅色。Scale bar=100μm。實(shí)際染色效果會(huì)因樣品、檢測(cè)條件的不同而略有差異，本圖僅供參考。
本試劑盒C0153S和C0153M用于切片的染色，每個(gè)切片樣品各使用100μl染色液，可以分別進(jìn)行100次和500次染色。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0153S-1 | 阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0) | 10ml |
| C0153S-2 | 核固紅染色液 | 10ml |
| — | 說明書 | 1份 |
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0153M-1 | 阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0) | 50ml |
| C0153M-2 | 核固紅染色液 | 50ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
室溫避光保存，一年有效。長(zhǎng)期不使用可以4℃或-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索染色適宜的條件。
染色過程應(yīng)在濕盒中進(jìn)行，防止染液風(fēng)干。
核固紅復(fù)染的過程推薦淺染，通常能夠分辨細(xì)胞核即可，顏色過深有可能影響細(xì)胞觀察。
應(yīng)根據(jù)不同的組織類型選取pH1.0或pH2.5的阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒；對(duì)于不同的組織，染色時(shí)間也不完全相同。
本試劑盒中的阿爾新藍(lán)染色液已配制在酸性溶液中，無須再進(jìn)行額外的酸化處理。
如果阿爾新藍(lán)染色液出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)勿使用。
誤放入冰箱等低溫條件下，核固紅染色液會(huì)出現(xiàn)析出物。此時(shí)可以25-50℃水浴加熱，充分溶解并混勻后使用。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
1.樣品處理：
a.對(duì)于石蠟切片。
石蠟切片的制備：按照常規(guī)方法進(jìn)行取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘片等步驟制備石蠟切片。
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
80%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
b.對(duì)于冰凍切片：
冰凍切片的制備：按照常規(guī)方法進(jìn)行取材、速凍、切片、烘片等步驟制備冰凍切片。
蒸餾水洗滌2分鐘。
c.對(duì)于血涂片、骨髓涂片：
晾干即可。
2.阿爾新藍(lán)染色液染色。
a.對(duì)于石蠟切片和冰凍切片：
(a)每個(gè)切片滴加50-100μl阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0)，置于濕盒中染色1小時(shí)，去除染液。蒸餾水洗滌3次，每次10秒。
(b)每個(gè)切片滴加50-100µl核固紅染色液，染色5-10分鐘，去除染液，自來水洗滌5分鐘。
(c)切片依次浸入70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，無水乙醇10秒，然后使用二甲苯透明1分鐘，中性樹脂封片。
(d)在顯微鏡下觀察和拍照。
b.對(duì)于血涂片、骨髓涂片：
(a)每個(gè)切片滴加50-100μl阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0)，置于濕盒中染色1小時(shí)，去除染液。蒸餾水洗滌3次，每次10秒。
(b)每個(gè)切片滴加50-100µl核固紅染色液，染色5-10分鐘，去除染液，自來水洗滌5分鐘。
(c)晾干后在顯微鏡下觀察和拍照。
注：染色過深或過淺應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間。
