Enhanced Cell Counting Kit-8，簡(jiǎn)稱(chēng)增強(qiáng)型CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒，比普通的CCK-8試劑盒具有更好的檢測(cè)靈敏度和更寬的線(xiàn)性范圍。
WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的
formazan(參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線(xiàn)性關(guān)系。
圖1. WST-8檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)
WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來(lái)溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高。
WST-8和WST-1相比，檢測(cè)靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)。
本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的增強(qiáng)型CCK-8溶液，無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作。無(wú)須使用同位素，所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan�？梢杂糜诖笈繕悠返臋z測(cè)。
酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。
WST-8對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。加入增強(qiáng)型CCK-8溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測(cè)時(shí)間更加靈活，便于找到最佳測(cè)定時(shí)間。
各種細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的比較和選擇
本試劑盒可以測(cè)定100個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
| C0041 | 增強(qiáng)型CCK-8溶液 | 1ml |
| — | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
保存條件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
注意事項(xiàng)：
由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)問(wèn)題。一方面，由于96孔板周?chē)蝗ψ钊菀渍舭l(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。
用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
使用說(shuō)明：
1. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2. 每孔加入10微升增強(qiáng)型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升增強(qiáng)型CCK-8溶液，其它情況以此類(lèi)推�？梢杂眉恿讼鄳�(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 在450nm測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片�？梢允褂么笥�600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
5. 將不同數(shù)量的HeLa細(xì)胞按照每孔100微升培養(yǎng)液接種到96孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁充分后，每孔加入10微升的增強(qiáng)型CCK-8溶液孵育2小時(shí)后測(cè)定A450的檢測(cè)效果圖參考圖2。檢測(cè)效果僅供參考，實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因檢測(cè)儀器等的不同而存在差異。
圖2. 增強(qiáng)型CCK-8試劑盒測(cè)定不同數(shù)量HeLa細(xì)胞的檢測(cè)效果圖。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 增強(qiáng)型CCK-8溶液對(duì)細(xì)胞的毒性大小如何？
增強(qiáng)型CCK-8溶液對(duì)細(xì)胞的毒性非常低，和普通的CCK-8溶液相當(dāng)或者毒性更低，通常觀察不到細(xì)胞毒性。細(xì)胞在CCK-8法檢測(cè)后仍然可以正常生長(zhǎng)，并以用于其它的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。但為了避免增強(qiáng)型CCK-8溶液可能帶來(lái)的對(duì)于后續(xù)檢測(cè)的影響，除非該細(xì)胞極難獲得，否則不推薦把增強(qiáng)型CCK-8溶液孵育過(guò)的細(xì)胞用于其它實(shí)驗(yàn)。
2. 如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a. 適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量。
b. 延長(zhǎng)加入增強(qiáng)型CCK-8溶液后的孵育時(shí)間。
