本產(chǎn)品在柱式真菌DNAOUT(CAT#:70901)基礎(chǔ)上改良而得的大提升級(jí)產(chǎn)品,主要用于大量快速?gòu)母鞣N真菌材料中提取基因組DNA。跟柱式真菌DNAOUT相比,它具有下列特點(diǎn):
1. 處理量大,一次可以處理1-3克各種真菌組織。
2. 純度高,OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制劑,得到的DNA可以 不經(jīng)稀釋直接用于酶切、PCR、 real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting,microsatellite analysis等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
3. 產(chǎn)率一般在10-100 μg/g真菌樣品。離心吸附柱最大吸附量為800 μg。
4. DNA片段長(zhǎng)度一般在20-40 Kb左右。
5. 適用范圍廣,適用于絕大多數(shù)真菌材料,包括酵母(S. cerevisiae,S. pomb,Pichia pastoris)等。
使用及效果
將10-30 mL 真菌細(xì)胞沉淀或1-3 g左右的真菌菌絲、孢子和子實(shí)體在液氮中研磨,轉(zhuǎn)移到50 mL塑料離心管中,加入10 mL溶液A和0.1 mL RNase A,吹打混勻,65℃保溫5-10分鐘后離心5分鐘,轉(zhuǎn)移上清到一新的50 mL離心管中,加入等體積溶液B,混勻后冰浴5分鐘,離心5分鐘,再轉(zhuǎn)移上清到一新離心管中,加入1.5 倍體積(跟總體積比)的溶液C,混勻后轉(zhuǎn)移到大提離心吸附柱中,室溫放置5分鐘后離心5分鐘,用25 mL通用洗柱液洗兩次,空甩半分鐘,將大提離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的50 mL離心管中,加1 mL DNA洗脫液,室溫離心即得DNA。
用本產(chǎn)品提取15 mL過夜培養(yǎng)的比赤酵母菌液,最后用1 mL洗脫,取10 μL在0.8%瓊脂糖凝膠中,300V電泳5分鐘,染料為綠如藍(lán),緩沖液為SuperBuffer-2