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柱式BAC DNAOUT

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一般而言,使用硅膠柱純化質(zhì)粒時,只能純化小于30 Kb以下的質(zhì)粒載體,大

于30 Kb質(zhì)粒因牢牢結(jié)合在硅膠基質(zhì)中,會導(dǎo)致質(zhì)粒產(chǎn)量大大降低。本產(chǎn)品對本公

司的柱式質(zhì)粒提取試劑盒進(jìn)行優(yōu)化而得,它采用了改良的細(xì)菌裂解和質(zhì)粒DNA上柱

條件,確保大型的質(zhì)粒(大至100 Kb的質(zhì)粒)能有效地結(jié)合到硅膠柱中,并可高效

地洗脫出來。其流程如下:

 


1. 適用于不超過100 Kb的大型質(zhì)粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。

如果超過100 Kb,建議使用沉淀法或離子交換法。

2. 可從1.5-5.0 mL 細(xì)菌培養(yǎng)液中純化1 μg左右大型質(zhì)粒DNA。

3. 安全,無酚氯仿等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提。

4. 柱式操作,比經(jīng)典的沉淀法操作簡單,重復(fù)性好,每次都能獲得理想效果。

5. 得到的DNA更純凈,可以直接用于PCR、酶切和測序,不需要再純化。

6. 超值,性價比高。

使用及效果

在1.5 mL離心管收集1-5 mL過夜培養(yǎng)飽和菌液,離心1分鐘,用0.2 mL溶液A

重懸沉淀,再與0.2 mL溶液B混勻,再加入0.4 mL溶液C,混勻,室溫靜止2分鐘,

離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中,靜置2分鐘,離心1分鐘,棄收集管中

的廢液,加入0.5 mL的通用洗柱液,離心1分鐘,棄廢液,重復(fù)上一步1次。離心1

分鐘,甩干殘留液體,將DNA純化柱置于新的1.5 mL離心管(自備)中,加入50

μL DNA洗脫液保溫2分鐘,離心1分鐘,管底即得BAC質(zhì)粒DNA。

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