產(chǎn)品縮寫：TGEV Ab
貨號(hào)：E513101
版本：2019.2
1
豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible Gastroenteritis Virus，TGEV）引起的豬的一種高度接觸
性消化道傳染病。以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征。
本試劑盒用于檢測(cè)豬血清、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體，可用于豬傳染性胃腸炎病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
【原
理】
本試劑盒由預(yù)包被豬傳染性胃腸炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)
豬血清、血漿樣本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬傳染性胃腸炎
病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)
合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成
正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬傳染性胃腸
炎病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號(hào)
名稱
規(guī)格/96T×1
規(guī)格/96T×2
規(guī)格/96T×5
1
酶標(biāo)記物
11ml×1(紅蓋)
11ml×2(紅蓋)
26ml×2(紅蓋)
2
樣品稀釋液
50ml×1(黃蓋)
50ml×1(黃蓋)
200ml×1(黃蓋)
3
20X 濃縮洗滌液
40ml×1(白蓋)
40ml×1(白蓋)
200ml×1(白蓋)
4
底物液 A
6ml×1(白蓋)
11ml×1(白蓋)
26ml×1(白蓋)
5
底物液 B
6ml×1(黑蓋)
11ml×1(棕蓋)
26ml×1(黑蓋)
6
終止液
6ml×1(黃蓋)
11ml×1(黃蓋)
26ml×1(黃蓋)
7
陽性對(duì)照
1.0 ml×1(紅蓋)
1.5 ml×1(紅蓋)
2.0 ml×1(紅蓋)
8
陰性對(duì)照
1.0 ml×1(綠蓋)
1.5 ml×1(綠蓋)
2.0 ml×1(綠蓋)
9
酶標(biāo)板
96T×1
96T×2
96T×5
10
蓋板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
說明書
1
1
1
13
稀釋板
1
2
5
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期 12 個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為 2 個(gè)月。
【適用儀器】 含 450nm、630nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品 1 周內(nèi)可于 2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按 40 倍稀釋（如 5μl 血清加入 195μl 樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋成工作洗滌液(如 19 份蒸餾水或去離子水+1
份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫 30 分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照 1 孔、陰性/陽性對(duì)照各 2 孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液 100μl；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照 100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品 100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃（推薦水�。┍芄夥磻�(yīng) 30 分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加 350 ul 工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物 100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜，置 37℃避光反應(yīng) 30 分鐘。
7.洗滌，同步驟 5。
8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置 37℃避光反應(yīng) 10 分鐘。產(chǎn)品縮寫：TGEV Ab
貨號(hào)：E513101
版本：2019.2
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9.每孔加終止液 50μl，混勻，于 450nm(可用 630nm 作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A 值），無參比波長(zhǎng)用空白孔調(diào)零(即所有孔
吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.10，陽性對(duì)照≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品的 OD 值即 ODS；
2.閾值計(jì)算：SP 值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；
SP 值≥0.2，結(jié)果判定為陽性；SP 值＜0.2，結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體，根據(jù) A 值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
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