BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離 子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑,混合一起即成為蘋果綠,即BCA工作試劑。在堿性條件下,BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時,蛋白質(zhì)將Cu2+還原為Cu+,一個 Cu+螯合二個BCA分子,工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復(fù)合物,最大光吸收強度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
1、 操作簡單,快速,45分鐘內(nèi)完成測定,比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便;
2、 準(zhǔn)確靈敏:試劑穩(wěn)定性好,BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-2000μg/ml。
3、 經(jīng)濟(jì)實用,除試管外,測定可用微板法操作,大大節(jié)約樣品取樣量;
4、 抗試劑干擾能力比較強,如去垢劑,尿素等均無影響
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計/酶標(biāo)儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為562nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、漩渦混勻器
4、微量移液器