需儀器及自備試劑：
1、分光光度計(jì)（比色測(cè)定波長(zhǎng)為530nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、漩渦混勻器
4、微量移液器
樣本收集與前處理:
血清（漿）可直接測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程:
1、按說(shuō)明操作加入樣本、R1、R2、R3，37ºC反應(yīng)15分鐘
2、按說(shuō)明操作加入R4、R5，混勻
3、530nm波長(zhǎng)1cm光徑，比色
一、測(cè)定原理:
NOS催化L-Arg和分子氧反應(yīng)生成NO,NO與親核性物質(zhì)生成有色化合物，在.530nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)吸光度的大小可計(jì)算出NOS活力。
二、試劑組成與配制:(50管/48樣)
試劑一:底物緩沖液6mlx2瓶，-20C 以下避光冷凍保存3個(gè)月。臨用前化凍搖勻。沒(méi)有用完的試劑，可以-20°C以下避光冷凍保存以備下次再用。
試劑二:促進(jìn)劑淡黃色或白色粉劑x3支，稀釋液0.6 mlx3支。-20C 以下冷凍保存6個(gè)月。測(cè)試前取稀釋液一支0.6ml 加入一支粉劑中充分混勻
（即將1.5ml離心管反復(fù)顛倒，并將小離心管尖部的液體彈下來(lái))，測(cè)試后剩余的試劑可放入-20C以下冷凍保存，時(shí)間不超過(guò)一周。若發(fā)現(xiàn)粉劑變成黃褐色或咖啡色，則不可以再用。
試劑三:黃色顯色劑6ml×1瓶，4℃避光冷藏保存3個(gè)月。
試劑四:透明劑6ml×1瓶，室溫保存6個(gè)月。天冷后會(huì)凝固，37℃水浴變澄清時(shí)再使用。試劑五。終止劑60mlx2瓶，4C保存6個(gè)月。室溫低會(huì)出現(xiàn)渾濁，37℃水浴至透明再用。
三、注意
1、促進(jìn)劑最好現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后盡量一日內(nèi)用完，如有剩余則-20℃以下保存不超過(guò)一周;未配制之前的2號(hào)促進(jìn)劑和稀釋液均應(yīng)-20C以下保存，如淡黃色或白色粉末變成咖啡色或黃褐色顆粒則失效不可用。
2、NOS活性低，穩(wěn)定性差，樣品或勻漿上清如不馬上檢測(cè)，應(yīng)置-20℃ 以下冷凍保存。3、試劑一與配制好的試劑二應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、室溫低時(shí)，NOS 5號(hào)會(huì)出現(xiàn)渾濁，如果已經(jīng)在測(cè)試管中加入了NOS 5號(hào)，可將測(cè)試管對(duì)著燈光，觀察有無(wú)結(jié)晶或渾濁。如果有結(jié)晶或渾濁，請(qǐng)將每只測(cè)試管37C水浴鍋中晃動(dòng)5分鐘，再比色。
