注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NADP+和NADPH含量測定可以計算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應密切相關。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調控作用。
測定原理：
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測吸光值，從而測定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測NADP+含量。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
酸性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20 ℃保存，用時加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑四：粉劑×1支，4 ℃保存，用時加入4mL蒸餾水，混勻；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑五：液體1.8mL×1支，4 ℃保存；
試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
NADP+和NADPH的提�。�
1 血清（漿）中NADP+和NADPH的提取
NADP+的提�。喊凑昭澹{）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
NADPH的提�。喊凑昭澹{）體積（mL）：堿性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2組織中NADP+和NADPH的提取：
NADP+的提�。喊凑战M織質量（g）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
NADPH的提�。喊凑战M織質量（g）：堿性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1mL堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3 細胞或細菌中NADP+和NADPH的提�。�
NADP+的提�。合仁占毎蚣毦诫x心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
NADPH的提�。合仁占毎蚣毦诫x心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：堿性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至570nm，蒸餾水調零。
2、加樣表(在1.5mL棕色EP管中按下表依次加樣）：
試劑名稱(μL)對照管測定管
樣本5050
試劑一250250
試劑二7575
試劑三7575
試劑四7575
試劑五3535
試劑六500混勻，室溫避光靜置20min
試劑六500
充分混勻，靜置5min后，20000g，25℃離心5min，棄上清，沉淀中加入：
試劑七10001000
混勻，570nm下比色，讀取對照吸光值A1和測定管吸光值A2，計算△A=A2-A1。
