Stbl3 菌株來(lái)源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株�；蚪M含有重組酶 recA13 突變，可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶 endA1 突變， 體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng) pUC19 檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率 >108cfu/μg DNA。
操作說(shuō)明
1.Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中）， 加入目的 DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打 EP 管底輕輕混勻，冰上靜置 25 分鐘。
2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入 0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基或 LB 培養(yǎng)基（推薦使用 SOC 培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)化效率）。
4.30℃，225 rpm 復(fù)蘇 90 分鐘。 （當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)， 30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化 control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃， 225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。）
5.5000rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C. 培養(yǎng)基上。
6.將平板倒置放于 30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化 control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃培養(yǎng)過(guò)夜）
注意事項(xiàng)
1.對(duì)不穩(wěn)定 DNA 片段的克隆或逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體的構(gòu)建，涂板后平板應(yīng)在 30℃培養(yǎng)，以減少發(fā)生
錯(cuò)誤重組的概率。
2.制備高純度病毒質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)使用新鮮轉(zhuǎn)化的平板接菌，新鮮菌液提取質(zhì)粒，菌液不可低溫保存后使用。
3.對(duì)不穩(wěn)定的克隆或病毒質(zhì)粒優(yōu)先以質(zhì)粒狀態(tài)保存，盡量避免將質(zhì)粒保存在大腸桿菌細(xì)胞中。
4.S.O.C.或 LB 培養(yǎng)基均可使用，S.O.C.可提高轉(zhuǎn)化效率 20%；實(shí)驗(yàn)人員可選擇在 37℃或 30℃培養(yǎng)細(xì)胞，
37℃條件下，菌生長(zhǎng)速度加快，有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組概率。
5.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)
間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率�；烊肽康� DNA 時(shí)應(yīng)輕柔操作。
6.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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