- 介紹： 基 因 型K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1
- 簡(jiǎn) 要 說 明 ：MG1655菌株來(lái)源于W1485，是K12的衍生菌株，是一種經(jīng)過較少改造，比較接近于“WT-野生型”的大腸桿菌
- 工程菌株。MG1655外觀形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)可做為擴(kuò)增大腸桿菌WT型基因的模板使用，也可作為蛋白表達(dá)的宿主菌株使用，
- 但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取
- 的質(zhì)粒被降解。pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。
- 操 作 說 明
- 1. MG1655感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底
- 輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
- 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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