- 介紹： 基 因 型F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明 JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant)，來(lái)源于DH5α菌株。在DH5α大腸桿菌基因組中引入tonA，賦予其抗噬菌體T1,T5的能力，即為JM330。JM330菌株最大的特點(diǎn)是其可以在體內(nèi)特異性降解甲基化質(zhì)粒模板，廣泛應(yīng)用于各種DNA定點(diǎn)突變?cè)囼?yàn)中。JM330菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1)和重組酶(recA1)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量； lacZΔM15的存在使JM330可用于藍(lán)、白斑篩選。生物開發(fā)的JM330感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×109cfu/μg DNA。
- 操 作 說(shuō) 明
- 1. JM330感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（例如：Dpn I消化產(chǎn)物等）并用手撥打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。
- 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇70分鐘。
- 4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。
- 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少15小時(shí)。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 2. JM330可以對(duì)未被Dpn I降 解掉的質(zhì)粒模板進(jìn)行進(jìn)一步的降解，因此可以保證定點(diǎn)突變具有更高的陽(yáng)性率。
- 3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；駾pn I消化產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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