【染色原理】
中性粘液物質(zhì)含有氨基己糖基,酸性粘液物質(zhì)也含有氨基己糖,并含有各種酸根。前者多見于胃粘膜的表面上皮,十二指腸腸腺、頜下腺和前列腺上皮等;后者多見于呼吸道和消化道的杯狀細(xì)胞、主動脈壁、軟骨基質(zhì)、角膜和皮膚等。胃粘膜表面上皮分泌中性粘液,而胃的腸腺化生或腸型胃癌細(xì)胞分泌酸性粘液,但胃型胃癌的癌細(xì)胞則分泌中性粘液。這二種粘液在蘇木素-伊紅染色時較難區(qū)分,而用(AB-PAS)染色時酸性粘液可被愛先藍(lán)染為藍(lán)色,中性粘液則可被PAS染為紅色。
【樣本處理】
石蠟切片
①脫蠟:石蠟切片在脫蠟劑中脫蠟⒉次(最好在37℃氣浴箱中進(jìn)行),每次10~15分鐘。
(本所有無毒環(huán)保拖拉機(jī)供應(yīng))
②梯度入水:95%、70%、30%乙醇各2分鐘,蒸餾水2分鐘。
【染色步驟】
玻片法
①蒸餾水稍洗樣本,滴加愛先藍(lán)染液染色10~20分鐘,水洗30秒左右;
②將高碘酸染液滴加在玻片的樣本上,使其全部覆蓋樣本,將此玻片輕輕平放于染色架上,
室溫孵育10分鐘。
③取出染色玻片,蒸餾水洗玻片2~3分鐘。
④玻片未完全干透前,滴加雪夫試劑于玻片樣本上,用洗耳球?qū)⑷疽捍祫虿⑷扛采w樣本,室溫孵育3~5分鐘。孵育結(jié)束后,取出染色玻片,自來水流水緩慢沖洗玻片5分鐘。滴加蘇木素染20~30秒,流水沖凈,待干后鏡檢。建議封片后觀察。
染缸法
蒸餾水稍洗樣本,將玻片放入愛先藍(lán)染液的染缸中染色10~20分鐘,水洗30秒左右;將玻片放入裝有高碘酸的染缸中,室溫孵育10分鐘。
③取出染色玻片,蒸餾水洗玻片2~3分鐘。
④玻片未完全干透前,將玻片放入裝有雪夫試劑的染缸中,室溫孵育3~5分鐘。
⑤孵育結(jié)束后,取出染色玻片,自來水流水緩慢沖洗玻片5分鐘。
⑥放入裝有蘇木素染液的染缸中染色20~30秒,流水沖凈,待干后鏡檢。建議封片后觀察。
【染色結(jié)果】
酸性粘液物質(zhì)呈藍(lán)色,中性粘液物質(zhì)呈紅色,混合粘液物質(zhì)呈紫紅色,細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。
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