人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型（HumanT-lymphotropicVirus1HTLV1）是一種感染后可導(dǎo)致血癌或其他轉(zhuǎn)移癌的RNA病毒，在體內(nèi)主要感染CD4+T淋巴細(xì)胞可引起成人T淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤、HTLV相關(guān)脊髓�。℉TLV-Iassociatedmyelopathy，HAM/熱帶痙攣性下肢癱，tropicalspasticparaparesisTSP）及色素層炎（uveitis），主要通過輸血、針頭、性行為、母子傳染。HTLV-I病毒是艾滋病毒（HIV-I)的遠(yuǎn)親，但HTLV-I和艾滋病的發(fā)生沒有任何關(guān)連。目前各捐血中心以酵素免疫法全面篩檢HTLV-I病毒。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高，引物是根據(jù)HTLV病毒1型高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠50次 20μL體系的探針法熒光定量RT-PCR反應(yīng)。
| 成分 | 編號 | 五孔盒包裝 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 190504a | 500μL（白蓋） |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 190504b | 100μL（紅蓋） |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 180701 | 1mL（綠蓋） |
| HTLV病毒1型探針法qRT-PCR 引物-探針混合液 | 15-87810yp | 150μL（棕色管） |
| HTLV病毒1型探針法qRT-PCR 陽性對照(1×10E7拷貝/μL) | 87810pc | 50μL（黃蓋） |
| 使用手冊 | 15-87810sc | 1份 |
本產(chǎn)品只能用于科研。
運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個月。
自備試劑樣品RNA，超純水。
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光RT-PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同。
3.在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在4號管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。二、樣品RNA的制備
7.如果有N個樣品，最好設(shè)置N+2個提取，多出的是PC（樣品制備陽性對照）和NC（樣品制備陰性對照）�？梢匀￡栃詫φ盏�1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為PC。另外用水作為NC。
8.用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒RNAout或免提取核酸釋放劑。
三、Probe qRT-PCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9個 RT-PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于RT-PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個 RT-PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于RT-PCR陰性對照（用水做模板），1個用于 RT-PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
| 成分/每管 | 樣品管 N+2個 | RT-PCR 陰性對照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管 （1-6管） |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| HTLV病毒1型探針法qRT- PCR引物-探針混合液 | 3μL | 3μL | 3μL |
| N+2個待測RNA樣本 | 5μL | 不加 | 不加 |
| 自備超純水 | 不加 | 5μL | 不加 |
| 第6步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （1-6號） |
不加 |
不加 | 5μL（1號樣到 1號管，2號樣 到2號管…） |
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 20min |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10min |
| RT-PCR反應(yīng) （45個循環(huán)） | 95℃ | 15sec |
|
| 60℃ | 1min（采集FAM通道的熒光信號） |
