產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆蟲(chóng)的質(zhì)體中，甚至在土壤中腐爛的植物殘?jiān)隙伎梢詸z測(cè)到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一種蛋白體，在茶樹(shù)生命活動(dòng)和茶葉加工過(guò)程中參與一系列由酶促活動(dòng)而引起的化學(xué)變化，故又被稱為生物催化劑。該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。雅吉生物多酚氧化酶(PPO)檢測(cè)試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測(cè)原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測(cè)定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀 420nm 處檢測(cè)吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算。該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測(cè)水果中多酚氧化酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水
2、研缽或勻漿器
3、離心管或試管
4、低溫離心機(jī)
5、96孔酶標(biāo)板
6、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①植物樣品：取 2g 植物組織或水果中層果肉加入 4ml 預(yù)冷的 PPO Lysis buffer 研磨或勻漿，10000g，4℃離心 15-20min，留取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，
-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。
③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer 進(jìn)行適當(dāng)勻漿，10000g，4℃離心 15-20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。
④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer 稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/div>
2、PPO 加樣：按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，注意：對(duì)照孔、測(cè)定孔中為同一待測(cè)樣品， 但對(duì)照孔中為提前加熱煮沸 5min 的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的 PPO 活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μ l) 待測(cè)樣品 | 對(duì)照孔 20(提前煮沸 |
5min) | 測(cè)定孔 20 |
| PPO Lysis buffer | 140 |
| 140 |
| PPO Assay buffer | 40 |
| 40 |
3、PPO 檢測(cè)：立即以酶標(biāo)儀，以對(duì)照孔為對(duì)照（調(diào)零），測(cè)定 420nm 處對(duì)照孔的吸光度(A 測(cè)定 0)；1min 后立即測(cè)定 420nm 處測(cè)定孔的吸光度(A 測(cè)定 1 )。我們建議加入PPO Assay buffer后立即檢測(cè)，加樣時(shí)間越短越好，其反應(yīng)基本在1-2min內(nèi)，其后反應(yīng)趨于平緩。
注意：該反應(yīng)系統(tǒng)是利用速率變化，求得相應(yīng)OD的變化，因此加入PPO Assay buffer立即計(jì)時(shí)很重要，每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則有可能由于操作時(shí)間有差異進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果偏差。
計(jì)算：
PPO 活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，每 1min 吸光度變化 0.01 所需酶量為一個(gè)活性單位。
組織樣本 PPO(U)={(A 測(cè)定 1-A 測(cè)定 0)×VT}/(W×VS×0.01×t)
式中：A 測(cè)定 1=反應(yīng) 1min 后測(cè)定孔的吸光度
A 測(cè)定 0=加入 PPO Assay buffer 立即測(cè)定的測(cè)定孔吸光度W=組織樣本的重量(g)
VT=提取酶液的總體積(ml) VS=測(cè)定時(shí)所用酶液體積(ml)
液體樣本 PPO(U)=(A 測(cè)定 1-A 測(cè)定 0)/(0.01×t)
式中：A 測(cè)定 1=反應(yīng) 1min 后測(cè)定孔的吸光度
A 測(cè)定 0=加入 PPO Assay buffer 立即測(cè)定的測(cè)定孔吸光度t=反應(yīng)時(shí)間（min）=1
注意事項(xiàng)：
1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。
2、PPO 酶液提取時(shí)，注意低溫操作，防止酶活性。4℃保存 2-3 天，亦可-20℃保存。
3、以煮沸的酶液為對(duì)照時(shí)，酶要充分失活。
4、如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定；每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。
有效期：6 個(gè)月有效。
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