土壤堿性蛋白酶（Solid-Alcalase Protease，S-ALPT）試劑盒正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ALPT 在堿性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測(cè)定原理：
堿性條件下，S-ALPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在680nm有特征吸收峰。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水
試劑組成和配置：
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解待用；剩余試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入100uL試劑七使粉劑潤(rùn)濕，然后加入20ml試劑一，轉(zhuǎn)入燒杯中沸水浴磁力攪拌溶解后待用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑四： 粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入50ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃
保存；
試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑六：液體 1.5mL×1 支，0.05mg/ml標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液；
試劑七：液體 1.5mL×1 支，4℃保存；
測(cè)定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二、三和四40℃水浴10min。
3、樣本測(cè)定：
| 試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | ||
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 | ||
| 試劑一（μL） | 100 | 300 | ||
| 試劑三（μL） | 200 |
| ||
| 混勻后，40℃水浴 30min，振蕩 5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸 | ||||
| 試劑二（μL） | 100 | 100 | ||
| 混勻，8000g 25℃離心 10min，取上清液 | ||||
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| 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
| 上清液（μL） | 150 | 150 |
| |
| 試劑六（μL） |
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| 150 | |
| 試劑四（μL） | 700 | 700 | 700 | |
| 試劑五（μL） | 150 | 150 | 150 | |
混勻，40℃水浴 20min，680nm下讀取各管吸光值A
注意 ：標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-ALPT 活性計(jì)算：
單位定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個(gè)S-ALPT活力單位。
S-ALPT(mg/d/g)=C 標(biāo)準(zhǔn)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 反總÷W÷T=48×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.02g。
