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土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒

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 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒測(cè)定意義:

S-SC能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收,其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、磷含量,微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān),是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理:

S-SC催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。

自備用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:甲苯5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入40mL蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;

試劑四:液體30mL×1 瓶,4℃保存。

測(cè)定步驟和加樣表:

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g)

0.1

0.1

試劑一(μL)

15

15

振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴 15min

試劑二(μL)

250

250

試劑三(μL)

750

 

蒸餾水(μL)

 

750

充分混勻,放入 37℃水浴培養(yǎng) 24 小時(shí),10000 g,4℃,離心 5min,取上清液

上清液(μL)

200

200

試劑四(μL)

500

500

充分混勻,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,蒸餾水稀釋10倍后(可以吸取100μL,加入900μL 蒸餾水稀釋;如果吸光度大于4,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)),510nm處蒸餾水調(diào)零,讀吸光值 A。計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-SC 活性計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 4.9x -0.062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè) S-SC 活力單位。

S-SC 活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.7×(ΔA+0.062)

 

 

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d;V 反總:反應(yīng)體系總體積:1.015mL;W:樣本質(zhì)量,0.1g。

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