植物總糖和還原糖檢測(cè)試劑盒(DNS 微板法)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用非還原糖能被酸水解為單糖的特性通過測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。
植物總糖和還原糖檢測(cè)試劑盒(DNS 微板法)檢測(cè)原理是還原糖在堿性加熱條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系，在 540nm 處用酶標(biāo)儀測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的還原糖和總糖的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 編號(hào) 名稱 | YC06981 00T | YC06983 00T | Storage |
| 試劑(A): Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 2ml | 4℃ |
| 試劑(B): DNS 檢測(cè)液 | 10ml | 30ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(C): 顯色液(總糖使用) | 5ml | 10ml | RT 避光 |
| 使用說明書 | 1 份 | ||
自備材料：
1、蒸餾水
2、50ml 離心管、1ml 離心管
3、離心機(jī)
4、水浴鍋或恒溫箱
5、酶標(biāo)儀、96 孔板
6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液
操作步驟(僅供參考)：
1、還原糖的提�。�
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②50℃水浴 30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖徹底浸出。
③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。
④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。
⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測(cè)液。
2、總糖的水解和提�。�
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12m蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時(shí)攪拌。。
③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液(約 50ul)，檢查水解是否完全，如已經(jīng)水解完全，則不顯示藍(lán)色。
④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾。
⑤取上清或?yàn)V液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 50ul 總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。
3、稀釋葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)：取干凈離心管或試管，按下表操作，依次獲得系列濃度的 Glu 標(biāo)準(zhǔn)。
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 |
| 蒸餾水 | 0.04 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0 |
| 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
4、加樣：取 1ml 離心管，按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻；如果樣品中的糖濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2~3 平行孔，求平均值。
| 加入物(ul) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
| 蒸餾水 | 50 | － | － |
| 系列 Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號(hào)) | － | 50 | － |
| 提取液 | － | － | 50 |
| DNS 檢測(cè)液 | 100 | 100 | 100 |
| 沸水浴中準(zhǔn)確煮沸 5min，取出，自來水冷卻至室溫。補(bǔ)加蒸餾水 250ul。 | |||
5、還原糖測(cè)定：混勻，依次抽取 300ul 轉(zhuǎn)移至相應(yīng) 96 孔板中，以空白孔調(diào)零，測(cè)定 540nm處標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔的吸光度。
計(jì)算：以系列 Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號(hào))，即標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)提取液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的葡萄糖濃度。
還原糖的百分含量：
100g 樣品中還原糖含量(g)=(c×VT)/(m×1000)×100=(c×VT)/(m×10)總糖的百分含量：
100g 樣品中總糖含量(g)=(c×N×VT)/(m×1000)×100×0.9
=(c×N×VT)/(m×10)×0.9
式中：c=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg/ml) VT=提取液的總體積(ml)=100 m=植物樣品的質(zhì)量(g)
N=總糖水解液的稀釋倍數(shù)=10
注意事項(xiàng)：
1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。
2、 待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。
3、 如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4、 總糖計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9 是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。
5、 6M 鹽酸配制：一般市售的濃鹽酸為 11.6~12M，用蒸餾水或去離子水與濃鹽酸 1：1混合即配制成 6M，鹽酸溶于水會(huì)放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。
6、 6M 氫氧化鈉配制：氫氧化鈉 24g 溶解于蒸餾水或去離子水，補(bǔ)至 100ml，氫氧化鈉溶于水會(huì)放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。
有效期：12 個(gè)月有效。
附錄 1：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：按說明書操作，通過分光光度計(jì)對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行吸光度的測(cè)定，其數(shù)值及標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(僅供參考)：
| 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 吸光度 | 0.256 | 0.635 | 1.043 | 1.409 | 1.746 |
