葡萄糖檢測(cè)試劑盒(GOD-POD比色法)
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
葡萄糖(Glucose,Dextrose，Glu)又稱玉米葡糖，簡(jiǎn)稱葡糖，化學(xué)式C6H12O6，分子量為180.16，是自然界分布最廣、最重要的一種單糖，屬于多羥基醛，用酶學(xué)方法測(cè)定葡萄糖是生化檢測(cè)中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，
上述酶學(xué)法特點(diǎn)是：
1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；
2、使用溫和的反應(yīng)條件；
3、對(duì)葡萄糖有專一性，不受其他糖及還原物的干擾；
4、操作簡(jiǎn)便；
5、適用于自動(dòng)分析儀。
雅吉生物葡萄糖檢測(cè)試劑盒(GOD-POD比色法)又稱葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，其檢測(cè)原理是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同時(shí)消耗溶液中的氧，產(chǎn)生的過氧化氫與氧化色原物質(zhì)反應(yīng)生成紅色的醌類化合物，初始反應(yīng)中過氧化氫的生成量與葡萄糖濃度成正比，分光光度計(jì)505nm進(jìn)行比色測(cè)定，專門用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的葡萄糖含量定量測(cè)定，但不宜直接檢測(cè)尿液中的葡萄糖含量，其中Glu標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)=90mg/dl。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。。
二、產(chǎn)品組成：
| 名稱規(guī)格 | 100ml | 存儲(chǔ) | |
| 試劑(A)：酚試劑 | 100ml | RT避光 | |
| 試劑(B)：酶試劑 | 磷酸鹽、4-AAP、GOD、POD | 100ml | -20℃避光 |
| 臨用前，酚試劑：酶試劑等比例混勻，即GOD-POD工作液，4℃保存。 | |||
| 試劑(C)：Glu標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L) | 1.5ml | 4℃ | |
| 試劑(D)：ddH2O | 1.5ml | RT | |
| 使用說明書 | 一份 | ||
三、自備材料：
1、生理鹽水或PBS
2、離心管或96孔板
3、勻漿機(jī)、離心機(jī)
4、水浴鍋或恒溫箱
5、分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀
四、操作步驟(僅供參考)：
1、樣本處理：
①血清、血漿、腦脊液樣品：從待測(cè)樣品中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接測(cè)定，如超過線性范圍(30mmol/L)，用生理鹽水或PBS稀釋后測(cè)定。
②細(xì)胞樣品：
a.取適量的細(xì)胞(一般推薦>106以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。b.用PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。
c.加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復(fù)3~5次；亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min，制備好的裂解液不可離心。
③組織樣品：準(zhǔn)確稱取適量組織樣品，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿，2500~3000g離心10min，取上清。
2、Glu測(cè)定：
①各種儀器按上表依次加入試劑。
②充分混勻,37℃水浴中孵育15min。
③立即用相應(yīng)儀器測(cè)定505nm處吸光度，以空白孔(管)調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔(管)、測(cè)定孔(管)的吸光度，分別記為A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定。
機(jī)器參數(shù)：
| 主波長(zhǎng) | 505nm |
| 反應(yīng)類型 | 終點(diǎn)法 |
| 反應(yīng)方向 | 升反應(yīng)(+) |
計(jì)算：Glu(mmol/L)=A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn)×5
參考區(qū)間：健康成年人空腹葡萄糖：3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl)
備注：Glu標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)=90mg/dl
性能指標(biāo)：
| 外觀 | 無色至淡黃色澄清液體 |
| 線性范圍 | 0~30mmol/L，r>0.990 |
| 變異系數(shù) | 批內(nèi)<2~5%，批間<5% |
| 空白吸光值 | <0.2(1cm光徑) |
| 穩(wěn)定性 | 密閉，6個(gè)月 |
注意事項(xiàng)：
1、配制好的GOD-POD工作液，4℃避光保存，1月有效；低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。
2、測(cè)定標(biāo)本用血清或以草酸鉀-氟化鈉抗凝的血漿(可抑制葡萄糖的分解)，可直接用于檢測(cè)腦脊液中的葡萄糖含量；待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。
3、尿葡萄糖目前多采用此法進(jìn)行定量測(cè)定，但不能直接檢測(cè)，需先用班氏法對(duì)尿液樣品做半定量試驗(yàn)，按測(cè)出的大概含量，用蒸餾水稀釋尿液使葡萄糖含量在3mg/ml以下，再進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即可，因?yàn)槲唇?jīng)處理的尿液中尿酸等還原性物質(zhì)的濃度較高，影響過氧化物酶反應(yīng)，可能會(huì)造成結(jié)果假性偏低。
4、隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，低濃度樣品亦會(huì)顯紅色，所以15min后應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，時(shí)間不宜過久。
5、采用酶標(biāo)儀未調(diào)零情況下雅吉生物空白參考范圍在0.04~0.09之間，5mmol/L標(biāo)準(zhǔn)參考范圍在0.25~0.45之間，由于儀器設(shè)備、操作方法等不同，參考范圍會(huì)有差異。
6、該試劑盒測(cè)定下限為0.1mmol/L，測(cè)定上限為30mmol/L；以肉眼觀察，濃度≤
0.6mmol/L幾乎呈無色，濃度在0.7mmol/L即可顯淡紅色，濃度≥2.5mmol/L可顯紅色，一般情況下接近上限比接近下限更準(zhǔn)確。
7、本法線性范圍可達(dá)30mmol/L，如果樣品葡萄糖濃度過高，結(jié)果可能呈假性降低，應(yīng)用生理鹽水或PBS等稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
有效期：6個(gè)月有效。
