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尿酸(Uric Acid, UA)含量測(cè)定試劑盒微量法

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 注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

尿酸(Uric Acid, UA)含量測(cè)定試劑盒微量法測(cè)定意義:
UA 是鳥(niǎo)類(lèi)和爬行類(lèi)動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。
此外,UA 還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量
不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中 UA 升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化,
相反 UA 降低會(huì)引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。
測(cè)定原理:
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2及 H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰化鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,
Fe3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類(lèi)化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,
測(cè)定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值,可計(jì)算尿酸的含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
緩沖液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:
A:用于標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 緩沖液溶解。
B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 緩沖液溶解。
試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。
測(cè)定操作表:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm。
2、 操作表
標(biāo)準(zhǔn)管 空白管 測(cè)定管
試劑一(μL) A, 60 B, 60 A, 60
H2O(μL) 180 240 180
試劑二(μL) 60
樣品(μL) 60
混勻,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,空白管調(diào)零,分別測(cè)定標(biāo)
準(zhǔn)管和測(cè)定管在 505nm 處的吸光值,記為 A 標(biāo)和 A 測(cè)。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
UV 含量計(jì)算公式:
尿酸(μmol/L)=(A 測(cè)÷A 標(biāo))×C 標(biāo)
A 測(cè):測(cè)定管吸光值;A 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管吸光值;C 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度 500μmol/L
注意事項(xiàng):
1. 血清樣本請(qǐng)?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)測(cè)定,或者 4℃密封避光保存不超過(guò) 72 小時(shí)。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. 最低檢出限為 10μmol/L。
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