【用途】
【包裝規(guī)格】：
48反應(yīng)/盒
【試劑盒成分】：
| 組成 | 含量 |
| R buffer | 1.2 mL×2管 |
| B buffer | 150μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】：
儲存條件：儲存溫度≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；產(chǎn)品有效期：12個月。
【操作步驟】：
1.試劑準備（在試劑準備區(qū)進行）
1.1取出包裝盒中的各組分(凍干粉除外)，室溫放置，待其溫度平衡至室溫后，混勻后瞬時離心備用。
1.2根據(jù)待測樣本，陰性對照，陽性對照的數(shù)量裝備凍干粉，每個干粉反應(yīng)管加入45 μL R buffer （注意：R buffer需完全融化混勻，否則會對實驗效果產(chǎn)生影響）；
2樣本加樣（在樣本處理區(qū)進行）
2.1向反應(yīng)管中加入2.5 μL核酸模板（正對照反應(yīng)請加入試劑盒提供的2.5 μL正對照模板）；
2.2每個反應(yīng)管加入2.5 μL B buffer, 蓋好管蓋（對于多個反應(yīng)，建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)）；上下顛倒反應(yīng)管8-10次充分混合，混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
3 核酸擴增（在擴增區(qū)進行，請參照各儀器說明書進行設(shè)置）
3.1 將反應(yīng)管放入熒光檢測設(shè)備中并記錄樣本放置順序。熒光檢測程序設(shè)置為：恒溫39 oC；每30 s采集一次FAM通道熒光值，共40個循環(huán)；反應(yīng)時間20 mins。
注：如使用ABI系列PCR儀，請務(wù)必于passive reference和quencher處均選擇“none”。
【結(jié)果判讀】：
1. 建議使用我公司推薦的恒溫?zé)晒鈹U增儀（WL-1）.
陽性判斷：有 “S”型擴增曲線，機器顯示結(jié)果為“+”；
陰性判斷：無 “S”型擴增曲線，機器顯示結(jié)果為“-”；
注：當受樣本顏色或其他因素影響，機器顯示結(jié)果為“+”但并無 “S”型擴增曲線時，結(jié)果判定依舊為陰性。
2. 使用熒光定量PCR設(shè)備時請在確定擴增過程中有類似“S”型擴增曲線時，結(jié)合以下原則進行判讀，若無則判定為陰性：
| 序號 | 通道 | Ct值 | 結(jié)果判斷 |
| 1 | FAM | UNDET或40 | 樣本低于檢測限，報告為陰性 |
| 2 | FAM | ≤37 | 報告為陽性 |
| 3 | FAM | 37-40 | 復(fù)檢一次，如仍為37-40，則報告為陰性 |
注：使用推薦儀器效果最佳。
【注意事項】：
1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應(yīng)時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。為了防止污染，實驗需要分區(qū)操作。一區(qū)：檢測制備區(qū)；二區(qū)，樣本制備區(qū)；三區(qū)，擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（分區(qū)之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染，各分區(qū)的器材請獨立使用）。
2. 實驗過程中穿戴工作服和一次性手套，試驗操作中產(chǎn)生的所有廢棄物及時處理。
3. 試劑盒保質(zhì)期12個月。每次使用時，請取出實驗所需的反應(yīng)單元的數(shù)量，置于冰浴條下并在8小時內(nèi)使用；剩余部分，請置于存儲條件下。
