一、產(chǎn)品簡介：
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞， 與機體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，O2-既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過氧化氫及脂質(zhì)過氧物自由基等對細胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。
雅吉生物超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺微板法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測試劑盒，其檢測原理是在酸性條件下，2 份O2-與羥胺反應(yīng)生成 1 份 NO2-，NO2-在對氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，以酶標(biāo)儀測定 530nm 處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與 O2-成正比，根據(jù) A530 及 NO2-和 O2-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，可算出樣品中O2-的濃度。該試劑盒主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率及清除能力。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
| 名稱規(guī)格 | 50T | 存儲 |
| 試劑(A): NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) | 1ml | 4℃ |
| 試劑(B): O2- Lysis buffer | 125ml | 4℃ |
| 試劑(C): 羥胺溶液 | 30ml | 4℃ |
| 試劑(D): 氨基苯磺酸顯色液 | 30ml | 4℃ 避 光 |
| 試劑(E): 萘胺顯色液 | 30ml | 4℃ 避 光 |
| 使用說明書 | 一份 | |
三、自備材料：
1、蒸餾水
2、實驗材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、低溫離心機
6、恒溫箱或水浴鍋
7、分光光度計，比色杯
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①植物樣品：取正常的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g， 加入 2ml 預(yù)冷的O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測。
③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，以 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 按下表繼續(xù)稀釋：
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
| 蒸餾水 | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 |
| NO2-含量(μM) | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 |
3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置平行孔。
| 加入物(ml) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測定孔 |
| 蒸餾水 | 1 | — | — |
| 系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號) | — | 1 | — |
| 待測樣品 | — | — | 0.25 |
| O2- Lysis buffer | — | — | 0.25 |
| 羥胺溶液 | — | — | 0.5 |
| 混勻，25℃水浴孵育 20min。 | |||
| 氨基苯磺酸顯色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 萘胺顯色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 混勻，30℃水浴孵育 30min。 | |||
4、O2-測定：以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm、分光光度計測定標(biāo)準(zhǔn)管、測定管530nm 處吸光度(即為A標(biāo)準(zhǔn)、A測定)。
