牛腺病毒 3 型熒光定量 PCR 檢測(cè)試劑盒牛血清的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中有一項(xiàng)重要的指標(biāo)是病毒的檢測(cè)。比較常見(jiàn)的易感染奶牛和肉牛的病毒如 DNA 病毒：牛腺病毒 3 型（Bobine Adenovirus Type 3，BAV-3），主要引起牛的呼吸道和腸道疾病，其主要特征為肺炎、腸炎、結(jié)膜炎和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，是犢牛死亡的重要原因之一。其易感和潛伏性給畜牧業(yè)及其國(guó)際帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)，給細(xì)胞培養(yǎng)以及相關(guān)基礎(chǔ)研究帶來(lái)一定的問(wèn)題。因此，病毒的快速檢測(cè)是控制牛血清質(zhì)量的前提，除了傳統(tǒng)的培養(yǎng)傳代觀察細(xì)胞病變，血清學(xué)診斷技術(shù)外，我們?cè)谶@里引入熒光定量 PCR 的方法，來(lái)快速檢測(cè)血清樣品中是否污染有 BAV-3。本產(chǎn)品是根據(jù) BAV-3 核酸序列的保守區(qū) pol蛋白酶設(shè)計(jì)引物，定制的一種檢測(cè) BAV-3 的熒光定量 PCR 試劑盒。它具有下列
特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供 DNA 模板即可使用。
2.快捷，整個(gè) PCR 過(guò)程只要一小時(shí)。
3.靈敏度達(dá)達(dá) 100copies/reactlon 水平。
4.熒光 PCR mix 中含第二代飽和型熒光染料，效果好于 SYBR Green I。
5.密封體系，極大降低了假陽(yáng)性。
本產(chǎn)品跟各種熒光 PCR 儀器兼容
| 成 份 | 編號(hào) |
| 50 次塑料袋包裝 |
|
|
|
|
|
| 2×熒光 PCR Mix | 90408 |
| 1.5 mL |
|
|
|
|
|
| BAV-3 專一性引物一 | yw1277 |
| 100 uL |
|
|
|
|
|
| BAV-3 專一性引物二 | yw1278 |
| 100 uL |
|
|
|
|
|
| BAV-3 標(biāo)準(zhǔn)品 | yw12791280 |
| 40 uL |
| （1.27×10E11 拷貝/uL） |
|
|
|
|
|
|
|
|
| DNA 稀釋液 | 121206-10 |
| 10mL |
|
|
|
|
|
| 超純水 | 100935 |
| 1 mL |
|
|
|
|
|
| 使用手冊(cè) |
| 1 份 | |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
一、樣品 DNA 的制備（本試劑盒不含所需試劑）
用自備試劑抽提病毒樣品 DNA。注意：可以選用本公司的病毒 DNAout 或柱 式病毒 DNAout。
二、熒光 PCR 反應(yīng)（25 uL 體系）
1. 配制標(biāo)準(zhǔn)品，用 DNA 稀釋液將 BAV-3 標(biāo)準(zhǔn)品（1.27X10E11 拷貝/uL）稀
釋到不同的濃度，每個(gè)濃度差 10 倍，共 8-10 個(gè)梯度。此標(biāo)準(zhǔn)品系列將用于 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 設(shè)置 PCR 反應(yīng)：在 PCR 管中加入下列成分（N 取決于上步的稀釋梯度由客 戶自己決定）：
| 成分 | 樣品管 | 標(biāo)準(zhǔn)坪梯度 | 陰性對(duì)照 |
|
|
| （共 8-10 管） |
|
|
|
|
|
|
| 2×熒光 PCR Mix | 12.5 uL | 12.5 uL 每管 | 12.5 uL |
|
|
|
|
|
| 待檢測(cè)樣品 DNA（自備） | 1-5 uL | 無(wú) | 無(wú) |
|
|
|
|
|
| 標(biāo)準(zhǔn)品(8-10 個(gè)梯度) | 無(wú) | N uL 每管 | 無(wú) |
|
|
|
|
|
| BAV-3 專一性引物一 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
|
|
|
|
|
| BAV-3 專一性引物二 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
|
|
|
|
|
| 補(bǔ)超純水到 | 25 uL | 25 uL | 25 uL |
3. 上機(jī)進(jìn)行熒光定量 PCR。熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)如下（以 ABI7500 熒光定 量 PCR 儀為參考）：
| 過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
|
|
|
|
| 預(yù)變性 | 94℃ | 2 min |
|
|
|
|
| 兩步式 PCR 反應(yīng) | 94℃ | 30 s |
| （40 個(gè)循環(huán)） |
|
|
|
| 60℃ | 90 s |
4. 根據(jù) 8-10 管標(biāo)準(zhǔn)品的 Ct 值（x 軸）和濃度（y 軸）描出標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù) 待測(cè)樣品的 Ct 值技術(shù)按出樣品的濃度。
