分 187 種亞型。。大腸桿菌 O 抗原即脂多糖（LPS），對(duì)其多樣性的分析對(duì)流 行病學(xué)研究和疾病監(jiān)控預(yù)測(cè)有重要意義。目前已知大腸桿菌 O 抗原的編碼基 因位于 rfb cluster，本產(chǎn)品就是根據(jù) O1 亞型基因保守序列設(shè)計(jì)引物并開(kāi)發(fā)的 O1 型大腸桿菌專一性 PCR 診斷試劑盒。它具有下列特點(diǎn):
1.使用即用型 PCR 試劑盒，客戶不需要準(zhǔn)備各個(gè)成分，減少了操作步驟， 降低了操作誤差。
2. 專一性強(qiáng)，只檢測(cè) O1 型大腸桿菌，對(duì)其他 O 型大腸桿菌無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度高，每次 PCR 反應(yīng)最低可以檢測(cè)數(shù)百拷貝 O1 型大腸桿菌基因組。
4. 本產(chǎn)品足夠至少 50 次 PCR 檢測(cè)(40uL 體系，含陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照)。
| 成份 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
| 即用型 PCR Mix 3.0(含染料) | 90805a | 1 mL（A 袋） |
| 超純水 | 100935 | 1 mL（A 袋） |
| E.coli O1 專一性引物 F | YW11-690f | 1 OD（B 袋） |
| E.coli O1 專一性引物 R | YW11-690r | 1 OD（B 袋） |
| E.coli O1 陽(yáng)性對(duì)照，10E8 拷貝/uL | PC11-690 | 50 uL（C 袋） |
| 使用手冊(cè) | 11-690sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。E.coli O1 陽(yáng)性對(duì)照濃度很高，所以收
到貨后 E.coli O1 陽(yáng)性對(duì)照需要分開(kāi)放置，避免污染其他試劑和實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
樣品 DNA。
使用方法一、樣品 DNA 的制備
用自選方法純化 E.coli 的 DNA，也可以另購(gòu)本公司的細(xì)菌 DNAout，此 產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、引物的制備
1. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見(jiàn)引 物試管上的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10 pmol/μL），然 后各取 110μL 混合在一起得 220μL，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用。 220μL 足夠 100 次 PCR 反應(yīng)。
三、陽(yáng)性對(duì)照
2. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性 對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 E.coli O1 專一的 DNA片 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
使用本陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，用前最好梯度稀釋到 1000 拷貝
/uL。處理陽(yáng)性對(duì)照時(shí)最好在專門的區(qū)域操作。一定要注意不要污染其他 試劑和成分。
三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 uL 體系）
7. 根據(jù)樣品數(shù) N，設(shè)置 N+2 個(gè) PCR 反應(yīng)（一個(gè)是陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)是陰性對(duì) 照）。在 N+2 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分
電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本 PCR mix 含上樣液，故不需要另外加上樣液。 預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 1090 bp。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)該出現(xiàn) 1090 bp 片段， 陰性對(duì)照不應(yīng)該出現(xiàn) 1090 bp 片段，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效
