抗體修飾熱啟動(dòng)酶 PCR Mix
Abstart PCR Mix
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人、動(dòng)物的醫(yī)療或診斷程序，不能使用
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組成
組分 B110007-0001 B110007-0005
Abstart PCR Mix（2X）
( Mg2+終濃度 2 mM )
1 ml 5 ml
保存方法
-15°C 到 -25°C 保存，有效期見(jiàn)包裝。
產(chǎn)品介紹
Abstart PCR Mix 為預(yù)先混合的 Abstart Taq DNA 聚合酶、
反應(yīng)緩沖液、氯化鎂和 dNTP 的濃縮溶液。DNA 模版和引
物簡(jiǎn)單添加即可開(kāi)始 PCR 反應(yīng)。常規(guī) PCR 擴(kuò)增的一致性和
效率得以?xún)?yōu)化。
操作流程
1. PCR 反應(yīng)體系的設(shè)置：
1) 溶解并混勻 PCR 反應(yīng)所需的各種溶液。并放置于冰浴
上或冰盒內(nèi)。建議反應(yīng) PCR 液體分裝使用，避免反復(fù)
凍融。
2) 參考下表設(shè)置的反應(yīng),建議 PCR 反應(yīng)體系的配置在冰
浴或在冰盒上進(jìn)行：
試劑 50 μl 反應(yīng)體系
Abstart PCR Mix（2X） 25 μl
Template DNA X μl*
Primer F（20 μM） 1 μl
Primer R（20 μM） 1 μl
雙蒸水或 Milli-Q 水 Up to 50 μl
總體積 50 μl
*對(duì)于不同類(lèi)型的模板在 50 µl 反應(yīng)體積中推薦用量如下：
哺乳動(dòng)物基因組 DNA：0.1-1 µg；
大腸桿菌基因組 DNA：10-100 ng；
質(zhì)粒 DNA：0.1-10 ng。
過(guò)多的模板 DNA 容易導(dǎo)致非特異性的 PCR 產(chǎn)物。
3) 用移液器輕輕吹打混勻或輕微 Vortex 混勻，室溫離心
數(shù)秒，使液體積聚于管底。
4) 各設(shè)置好的 PCR 反應(yīng)管置于 PCR 儀上，開(kāi)始 PCR 反
應(yīng)。
2. PCR 反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置以擴(kuò)增 1 Kb 目的片段為例：
步驟 溫度 時(shí)間 循環(huán)數(shù)
預(yù)變性 95°C 3 min -
變性 95°C 30 s
退火 (Tm-5)°C 30 s 35 個(gè)循環(huán)
延伸 72°C 1 min
最終延伸 72°C 10 min -
保存 4°C forever -
1) PCR 反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR 產(chǎn)物的長(zhǎng)度
和 GC 含量等條件的不同設(shè)定不同的 PCR 反應(yīng)條件包
括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。
2) 延伸的時(shí)間設(shè)置需根據(jù) PCR 產(chǎn)物的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置，通
常每 kb 產(chǎn)物的延伸時(shí)間為 1 分鐘。例如 PCR 產(chǎn)物的
長(zhǎng)度為 1 kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 1 分鐘，PCR 產(chǎn)
物的長(zhǎng)度為 2 kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 2 分鐘，以
此類(lèi)推。
3) 對(duì)于初次進(jìn)行的 PCR，為盡量確�？梢詳U(kuò)增出預(yù)期的
PCR 產(chǎn)物，可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為 35。對(duì)于需進(jìn)行半定
量或定量的 PCR 反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，使
PCR 反應(yīng)達(dá)到平臺(tái)期。
#B110007 保存溫度：-20°C
包裝規(guī)格：1 ml/5 ml
Sangon Biotech
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