概述
本試劑提供了進(jìn)行簡(jiǎn)便,靈敏和防污染的PCR檢測(cè)系統(tǒng)。核心試劑包含了經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液,dNTPs Mix (以dUTP 替代dTTP),抗體修飾熱啟動(dòng)酶 (Abstart Taq DNA polymerase),UDG酶 (Uracil-DNA Glycosylase)和MgCl2溶液. UDG的作用原理：在PCR反應(yīng)前50°C,2min反應(yīng)中,UDG酶可水解PCR反應(yīng)液中含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵,釋放游離尿嘧啶。隨后進(jìn)行95°C,2 min 30 sec熱處理,在UDG酶失活的同時(shí)進(jìn)一步對(duì)磷酸骨架水解,從而消除含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的污染。UDG酶可以作用于單鏈或雙鏈DNA,對(duì)RNA無(wú)活性。
特點(diǎn)
- 只需加入適量的引物和探針或熒光染料,即可進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)。在PCR反應(yīng)前加入U(xiǎn)DG可降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,而對(duì)不含尿嘧啶的模板無(wú)任何影響,可選擇性水解含有尿嘧啶的 PCR 產(chǎn)物。在反應(yīng)中Abstart Taq DNA polymerase的加入使得反應(yīng)具有極強(qiáng)的特異性和高度靈敏度。
應(yīng)用
熒光定量PCR
組份
Abstart Master PCR Mix (25X),2X Reaction Buffer (Mg2+濃度2 mM)
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