本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有駱駝的成分�，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品 就是為滿足這一需求根據(jù)探針?lè)?/font> qPCR 原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 根據(jù)駱駝保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測(cè)出樣品中的駱駝成分，但不能檢測(cè)其他非駱駝成分。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。
6. 對(duì)混合樣品中駱駝成分的檢測(cè)下限為 0.01%，對(duì)樣品中駱駝成分的核酸檢測(cè)下限為0.1ng/µL。
本只能用于科研，足夠 50 次 20μL 體系的熒光定量 PCR
| 成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 190303 | 500 μL（本色蓋） |
| 熒光PCR 專用模板稀釋液 | 180701 | 1 mL（黃蓋） |
| 駱駝源性成分探針?lè)?/span> qPCR引物混合液 | 15-114yw | 100 μL（白蓋） |
| 駱駝源性成分 qPCR 探針 | 15-114pb | 50 μL（棕色管） |
| 駱駝源性成分探針?lè)?qPCR 陽(yáng)性 對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL） | 60908-114pc | 50 μL（黃蓋） |
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| 使用手冊(cè) | 15-114sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較
高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)
準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分
震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
4. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第一步稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列稀釋液的第 4 號(hào)做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
| 成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（2-7 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 駱駝源性成分探針?lè)?qPCR 探針 | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 駱駝源性成分探針?lè)?/span> qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 個(gè)待測(cè)樣品 DNA 模板 | 7 μL | - | - |
| 超純水 | - | 7 μL | - |
| 第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （2-7 號(hào)） |
- |
- | 各 7μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…） |
在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)）：
過(guò)程溫度時(shí)間
| 預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15sec |
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| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的熒光信號(hào)） |
數(shù)據(jù)處理
11. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值，再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 30。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 30 則為陰性，如果小于或等于 30
則為陽(yáng)性。
