超級核酸酶(≥99%) Super Nuclease, ≥99%)是一種來源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在非常寬泛的條件下降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然或變性等各種形式的DNA或RNA，產(chǎn)生長度為3至5個堿基的5'-單磷酸寡核苷酸。本產(chǎn)品用途廣泛，常用于重組蛋白、病毒疫苗等生物制品中去除核酸，以及有效降低細(xì)胞、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等。
本產(chǎn)品為超純級，純度≥99%，無蛋白酶活性，內(nèi)毒素極低，<0.25EU/KU。
超級核酸酶，又稱全能核酸酶或廣譜核酸酶，與Benzonase endonuclease、TurboNuclease等類似酶的氨基酸序列基本一致(主要是蛋白的氨基端或羧基端所帶的標(biāo)簽或殘留氨基酸序列略有不同)，具有同樣的酶催化活性和相同的用途，大多數(shù)情況下可以相互替代。具體使用時，需要注意純度和內(nèi)毒素水平對于后續(xù)分析檢測的影響。
超級核酸酶的穩(wěn)定性非常好。37℃保存3-5周，超級核酸酶能保持>90%的酶活性，在25℃保存10周后，酶活性基本沒有變化。
超級核酸酶采用PerfectProtein™技術(shù)平臺表達(dá)、純化，表達(dá)純化獲得的重組蛋白與Serratia marcescens中的天然核酸內(nèi)切酶氨基酸序列完全一致，沒有額外的標(biāo)簽，沒有額外的氨基酸，與天然粘質(zhì)沙雷氏菌的核酸內(nèi)切酶相比在生化特性方面相同。和本產(chǎn)品相似的帶有His tag的為超級核酸酶(≥99%, with His-tag) (D7126)單獨(dú)有售。本產(chǎn)品的基本信息如下表：
| 蛋白信息(About this protein) | |
| 名稱(Name) | 超級核酸酶 |
| 別名(Synonyms) | 全能核酸酶，廣譜核酸酶，活性核酸酶，Benzonase Nuclease，Benzonase Endonuclease，TurboNuclease，Universal Nuclease |
| CAS號(CAS No.) | 9025-65-4 |
| 分子量(MW) | ~26.7kDa |
| 外觀(Physical appearance) | 液體 |
| 活性(Biological activity) | 250U/μl |
| 活力單位(Unit definition) | One unit of Super Nuclease is defined as the amount of enzyme that causes a ∆A260 of 1.0 (equivalent to the complete digestion of 37μg DNA) in 30min. |
| 純度(Purity) | ≥ 99% by SDS-PAGE, protease-free |
| 配方(Formulation) | 10mM Tris (pH7.4), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% glycerol |
| 內(nèi)毒(Endotoxin) | <0.25EU/KU by LAL |
| 產(chǎn)品用途(Applications) | 有效去除重組蛋白中的核酸；有效去除病毒疫苗和普通重組病毒中的核酸，使其符合FDA指南中核酸污染的要求；實(shí)時定量PCR測定重組病毒滴度時去除病毒包裝細(xì)胞的核酸和包裝質(zhì)粒；降低細(xì)菌或細(xì)胞裂解液由核酸導(dǎo)致的粘度使其易于后續(xù)操作；防止細(xì)胞成團(tuán)；提高包涵體蛋白(inclusion bodies)復(fù)性率；在二維凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)的過程中，提高蛋白質(zhì)的分離效率和雙向電泳的分辨率。 |
本產(chǎn)品內(nèi)毒素極低。本產(chǎn)品經(jīng)去內(nèi)毒素處理，經(jīng)鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate, LAL)比色法檢測內(nèi)毒素含量<0.25EU/KU。
本產(chǎn)品適用范圍寬。超級核酸酶需1-2mM Mg2+作為輔助因子促進(jìn)其酶活性，最適范圍(Optimal Range, Enzyme Activity >90%)和有效范圍(Effective Range, Enzyme Activity >15%)見下表。
| Condition | Optimal Range | Effective Range |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-10mM |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
| Temperature | 37℃ | 0-42℃ |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100mM | >100mM |
| Na+, K+, NH4+ | 0-20mM | 0-150mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
| Triton X-100 | / | <0.4% |
| Sodium deoxycholate | / | <0.4% |
| SDS | / | <0.05% |
| Urea | / | <5M |
| (NH4)2SO4 | / | <100mM |
本產(chǎn)品活性好，效果佳。超級核酸酶與國外同類產(chǎn)品Competitor M對質(zhì)粒DNA的消化效果參考圖1。 如圖所示，本產(chǎn)品與Competitor M相比，效果基本一致甚至略好。
圖1.超級核酸酶(≥99%)消化質(zhì)粒DNA的效果圖。在50μl反應(yīng)體系(10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl2)中，加入5μg質(zhì)粒DNA，及相應(yīng)量的本產(chǎn)品或Competitor M，37℃孵育30min，反應(yīng)完畢后立即置于冰浴，并加入1μl 0.5M EDTA以終止反應(yīng)。取出10μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入2μl DNA上樣緩沖液(6X) (D0071)，在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測。實(shí)際效果會因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
本產(chǎn)品可有效降低細(xì)胞或細(xì)菌裂解液粘度。超級核酸酶有效降低哺乳動物細(xì)胞或細(xì)菌裂解液粘度的效果圖參考圖2。
圖2.超級核酸酶(≥99%)降低細(xì)胞或細(xì)菌裂解液粘度的效果圖。A. HEK293細(xì)胞經(jīng)RIPA裂解液(強(qiáng)) (P0013B)裂解后，未加超級核酸酶的樣品因大量基因組DNA釋放成粘稠狀，而經(jīng)過終濃度25和250U/ml室溫處理15min的樣品不粘稠；B. 按照每克E.coli BL21(DE3)濕菌加入5ml RIPA裂解液(P0013B)的比例設(shè)置4組樣品，分別加入相應(yīng)量的本產(chǎn)品，室溫處理30min，低速(350g×g)離心3min，未經(jīng)超級核酸酶處理的樣品因粘稠物質(zhì)較多導(dǎo)致大量細(xì)菌碎片懸浮在管中，加入超級核酸酶的樣品隨著超級核酸酶量的增加，粘度逐漸降低，上清逐漸增多且澄清；C. 取B中10μl上清在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測，加入超級核酸酶樣品的基因組DNA被降解為小片段。實(shí)際效果會因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
在最適反應(yīng)條件下，超級核酸酶對于不同樣品的推薦用量和處理時間請參考下表。注：實(shí)際用量和處理時間需根據(jù)樣品的實(shí)際情況進(jìn)行一定的摸索，若使用的溶液較為特殊，如為高鹽溶液，或偏酸性、偏堿性，或含有較高濃度的去垢劑、變性劑等，應(yīng)適當(dāng)增加超級核酸酶的用量或孵育時間。
| 實(shí)驗(yàn)類型 | 蛋白樣品制備 | 非藥物蛋白生產(chǎn) | 藥物蛋白生產(chǎn) | 疫苗、病毒生產(chǎn) | 細(xì)胞藥物 |
| 推薦產(chǎn)品 | (with His-tag) | ||||
| 細(xì)胞或樣品數(shù)量 | 1×108個細(xì)胞 (1ml裂解液) | 1g濕重 (重懸液5ml) | 1L發(fā)酵上清液 | 1L培養(yǎng)物 | |
| 最低終濃度 | 2.5U/ml | 2.5U/ml | 2.5U/ml | 0.1U/ml | 0.1U/ml |
| 推薦終濃度 | 25-250U/ml | 25-250U/ml | 25-250U/ml | 5-25U/ml | 1-5U/ml |
| 處理時間 | 5~60min (37℃)或30~120min (25℃) | ||||
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7121-5KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×20μl |
| D7121-25KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×100μl |
| D7121-100KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×400μl |
| D7121-500KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×2ml |
| D7121-2000KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×2ml×4 |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，三年有效。4℃保存，至少兩個月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品不建議-80℃保存，凍融可能會降低本產(chǎn)品的酶活性。
Mg2+是超級核酸酶的關(guān)鍵催化輔助因子，反應(yīng)緩沖液含有1-2mM Mg2+對超級核酸酶的活性是必須的。
參照最適范圍和有效范圍表格，若使用的溶液較為特殊，如為高鹽溶液，或偏酸性、偏堿性，或含有較高濃度的去垢劑、變性劑等，應(yīng)適當(dāng)增加超級核酸酶的用量或孵育時間。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
