TdT末端轉(zhuǎn)移酶
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| 末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為T(mén)dT的底物，加尾長(zhǎng)度可達(dá)5~300nt。該末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）分子量為58.3 kDa，無(wú)5’和3’核酸外切酶活性，反應(yīng)中加入Co2+可提高加尾效率。該酶廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基（如ddNTP，DIGdUTP）標(biāo)記DNA 3’末端、TdT介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記技術(shù)（細(xì)胞凋亡的原位檢測(cè)）等試驗(yàn)。該酶經(jīng)檢測(cè)無(wú)DNA內(nèi)切酶和外切酶污染，不含RNase。 | ||||||||||||||
組分 | ||||||||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||||||||
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活性定義 | ||||||||||||||
| 37℃60分鐘內(nèi)，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位 | ||||||||||||||
1×TdT Buffer | ||||||||||||||
| 100mM KCl, 30mM Tris-acera, 0.05% (v/v) Triton X-100 (pH 7.5 at 25 °C) | ||||||||||||||
儲(chǔ)存 | ||||||||||||||
| -20℃可保存3年。 | ||||||||||||||
熱失活 | ||||||||||||||
| 75°C 20min。 | ||||||||||||||
注意事項(xiàng) | ||||||||||||||
| 1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。 2、金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對(duì)Terminal Transferase活性具有抑制作用。 | ||||||||||||||
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