銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)
產(chǎn)品簡介：
銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、細胞色素氧化酶等，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結合，形成銅藍蛋白，5~10%的銅與清蛋白結合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測方法有分光光度計、原子吸收光譜法、中子活化分析法等。
雅吉生物銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)檢測原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結合的銅從白蛋白中解離出來，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與Cuprizone絡合，形成穩(wěn)定的藍色絡合物，通過酶標儀測定620nm處吸光度，形成的藍色與血清、血漿銅成線性關系，與標準品比較，根據(jù)公式計算出銅含量，該檢測試劑盒在62.8μmol/L以下線性關系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 名稱 | 100T | Storage |
| 試劑(A):銅標準(100μg/ml) | 1ml | 4℃避光 |
| 試劑(B):銅標準稀釋液 | 5ml | RT |
| 試劑(C):CU酸化液 | 15ml | 4℃ |
| 試劑(D):Lea蛋白沉淀液 | 25ml | 4℃避光 |
| 試劑(E):Cu Assay Buffer | 2x10ml | 4℃ |
| 試劑(F):Cuprizone顯色液 | 1.2ml | 4℃避光 |
| 試劑(G):ddH2O | 10ml | RT |
自備材料：
1、酶標儀、96孔板
2、1.5ml離心管或試管
3、離心機
操作步驟(僅供參考)：
1、制備樣品∶血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于Cu的檢測。
2、配制銅標準工作液︰取適量的銅標準(100μg/ml)，按銅標準(100μg/ml)∶銅標準稀釋液=1:24的比例配制銅標準(4μg/ml)，即為銅標準工作液;4℃避光保存，3個月有效。
3、Cu加樣∶最好選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無菌聚乙烯1.5ml離心管，以及潔凈96孔板，如果無法達到上述要求，應盡量避免使用銅污染的器皿，按下表操作。
| 加入物（μl） | 空白管/孔 | 標準管/孔 | 測定管/孔 |
| ddH2O | 200 | - | - |
| 銅標準(4μg/ml) | - | 200 | - |
| 待測樣本 | - | - | 200 |
| CU酸化液 | 140 | 140 | 140 |
| 充分混勻，室溫放置10min。 | |||
| Lea蛋白沉淀液 | 200 | 200 | 200 |
| 充分混勻，室溫放置10min , 3000g離心10min，吸取各管上清液 取96孔板按下列步驟操作。 | |||
| 上述上清液 | 100 | 100 | 100 |
| Cu Assay Buffer | 140 | 140 | 140 |
| Cuprizone顯色液 | 10 | 10 | 10 |
4、Cu測定∶混勻，室溫靜置20min，以空白調(diào)零，酶標儀620nm處測定標準孔和測定孔的吸光度(即為A標準和A測定)。
計算:
血漿、血清銅(μmol/L)=(A測定/A標準）×62.8
式中∶A測定=測定管的吸光度
A標準=標準管的吸光度
銅標準(4μg/ml)=銅標準(62.8μmol/L)
μg/dl=μmol/L/0.157
參考區(qū)間∶
成年健康人血清銅︰
男性∶10.99~21.98μmol/L(70~140μg/dl)
女性∶12.56~23.55μmol/L(80~150μg/dl)
注意事項∶
1、如果樣品濃度過高，應用去離子水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數(shù)。
2、實驗過程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。
3、玻璃器材盡量用10%的鹽酸浸泡24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。
4、試驗中儀器、試管、注射器等盡量避免銅污染。
5、測定波長可選600~640nm，檢測結果差異不大。
6、該試劑盒呈色穩(wěn)定，顯色后在4~20℃可穩(wěn)定1h。
7、隨著時間的延長，顏色會變淺或消失，應在1h內(nèi)檢測完畢。
8、Cu Assay Buffer應密閉保存，用完立即蓋緊蓋子，防止有效成分揮發(fā)。
9、經(jīng)典標準品采用銅標準(2μg/ml)，如儀器精密干擾小，可以采用銅標準(2μg/ml)，其計算公式為︰血漿、血清銅(μmol/L)=(A測定/A標準)×31.4。
有效期∶12個月有效﹔常溫運輸，4C保存。
附錄:參考標準曲線范圍空白調(diào)零，通過分光光度計測定吸光度，銅標準為2μg/ml時，OD值為0.05~0.07;銅標準為4μg/ml時，OD值為0.10~0.13;通過測定銅標準為0.1、0.5、1、2、4、8、16μg/ml 時的吸光度，作出其標準曲線
注意∶由于檢測儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會有波動，該值僅供參考，對于要求精確計算銅含量的，可以采用標準曲線進行多點測定;根據(jù)雅吉生物測定經(jīng)驗顯示，標準品濃度在0.5μg/ml 以下，50μg/ml 以上，標準曲線會有偏差。
