注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出CAT活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
工作液：液體24mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測(cè)定前將CAT檢測(cè)工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、 準(zhǔn)備96孔UV板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于340nm務(wù)必使用UV板）。
4、 在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，記錄240nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA＝A1-A2。
注意事項(xiàng)：出現(xiàn)負(fù)值怎么辦？
首先檢查吸光值是否超過(guò)3，如果超過(guò)3很可能是沒(méi)有用UV板，請(qǐng)換用UV板。如果未超過(guò)3，仍然出現(xiàn)負(fù)值則檢查反應(yīng)過(guò)程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說(shuō)明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負(fù)值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測(cè)。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒(méi)有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值，說(shuō)明該樣本測(cè)不到該酶活。
